| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 非编码RNA和长非编码RNA | 第13-25页 |
| 1.1 引言 | 第13-14页 |
| 1.2 非编码RNA的分类 | 第14-17页 |
| 1.3 非编码RNA的功能和作用 | 第17-19页 |
| 1.4 长非编码RNA的简介 | 第19-25页 |
| 1.4.1 长非编码RNA概述 | 第20-21页 |
| 1.4.2 长非编码RNA的功能和作用机制 | 第21-24页 |
| 1.4.3 lncRNA在疾病中的作用相关研究 | 第24-25页 |
| 第二章 circular RNA | 第25-35页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 circular RNA研究历史和现状 | 第25-28页 |
| 2.2.1 circular RNA的发现和鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.2 circular RNA的主要特征 | 第26-27页 |
| 2.2.3 circular RNA的长度 | 第27-28页 |
| 2.3 circular RNA的功能 | 第28-33页 |
| 2.3.1 circular RNA的发生机制 | 第28-29页 |
| 2.3.2 CDR1as/CIRS-7作为的miR-7海绵(sponge) | 第29-31页 |
| 2.3.3 内含子来源的circular RNA的功能 | 第31页 |
| 2.3.4 circular RNA其他的可能功能和应用前景 | 第31-33页 |
| 2.4 circular RNA在疾病发生中的作用和功能 | 第33-35页 |
| 第三章 实验材料和方法 | 第35-63页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-46页 |
| 3.1.1 质粒、菌株及细胞株 | 第35页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第35-36页 |
| 3.1.3 试剂和溶剂配制 | 第36-37页 |
| 3.1.4 Primer和siRNA的设计序列 | 第37-46页 |
| 3.2 实验方法 | 第46-63页 |
| 3.2.1 细胞复苏 | 第46页 |
| 3.2.2 细胞传代 | 第46-47页 |
| 3.2.3 细胞冻存 | 第47-48页 |
| 3.2.4 质粒构建 | 第48-54页 |
| 3.2.5 T载构建以及蓝白斑筛选 | 第54页 |
| 3.2.6 贴壁细胞转染 | 第54页 |
| 3.2.7 细胞核提取 | 第54-55页 |
| 3.2.8 RNA抽提 | 第55-56页 |
| 3.2.9 DNase消化 | 第56-57页 |
| 3.2.10 逆转录 | 第57-58页 |
| 3.2.11 Quantitative reverse-transcription PCR | 第58-59页 |
| 3.2.12 luciferase荧光蛋白检测 | 第59-60页 |
| 3.2.13 western blot检测 & protein blot | 第60-63页 |
| 第四章 结果和讨论 | 第63-87页 |
| 4.1 有一类circular RNA是和pol Ⅱ联系在一起的 | 第63-72页 |
| 4.1.1 验证其中15个circular RNA | 第64-68页 |
| 4.1.2 circular RNA的表达存在细胞特异性 | 第68-69页 |
| 4.1.3 circular RNA的序列中是有exon-intron-exon组成的 | 第69-70页 |
| 4.1.4 circular RNA在细胞中的拷贝数 | 第70-72页 |
| 4.2 circular RNA过表达情况研究 | 第72-77页 |
| 4.2.1 对15个circular RNA的前后序列进行比对 | 第72页 |
| 4.2.2 四种circular RNA过表达质粒的构建 | 第72-74页 |
| 4.2.3 四种质粒转染后,在细胞中过表达circular RNA的情况 | 第74-76页 |
| 4.2.4 四种质粒转染后,在HEK293细胞核中过表达circular RNA的情况 | 第76页 |
| 4.2.5 四种质粒转染后,过表达的circular RNA对parent gene的表达影响 | 第76-77页 |
| 4.3 ALU元件对circular RNA的影响 | 第77-80页 |
| 4.3.1 构建含有alu序列的质粒,检测是否成环 | 第77-79页 |
| 4.3.2 质粒转染后,表达的circular RNA对报告基因的表达影响 | 第79-80页 |
| 4.4 circular RNA的junction部分有AG-GT碱基对环功能的影响 | 第80-83页 |
| 4.4.1 构建有无AG-GT序列的质粒 | 第80页 |
| 4.4.2 第二批质粒转染后,在HEK293细胞核中过表达circular RNA的情况 | 第80-81页 |
| 4.4.3 第一批质粒当中,AG-GT对报告基因GFP的表达影响 | 第81-82页 |
| 4.4.4 第二批质粒当中,AG-GT对报告基因luciferase蛋白的表达影响 | 第82-83页 |
| 4.5 circular RNA的二级结构 | 第83-84页 |
| 4.6 讨论和结论 | 第84-87页 |
| 第五章 总结和展望 | 第87-91页 |
| 参考文献 | 第91-103页 |
| 博士期间发表的论文 | 第103-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
