| 符号说明 | 第6-12页 |
| 中文摘要 | 第12-15页 |
| ABSTRACT | 第15-18页 |
| 1 前言 | 第19-42页 |
| 1.1 鸡球虫病及免疫防治研究进展 | 第19-29页 |
| 1.1.1 鸡球虫病病原概述 | 第19页 |
| 1.1.2 鸡球虫生活史 | 第19-20页 |
| 1.1.3 鸡球虫病危害 | 第20-21页 |
| 1.1.4 鸡球虫病药物防治现状 | 第21-23页 |
| 1.1.5 鸡球虫免疫研究进展 | 第23-25页 |
| 1.1.6 鸡球虫疫苗研究进展 | 第25-28页 |
| 1.1.7 艾美耳球虫微线蛋白研究进展 | 第28-29页 |
| 1.2 表面展示系统概述及其应用 | 第29-33页 |
| 1.2.1 酵母表面展示 | 第29-31页 |
| 1.2.2 细胞表面展示 | 第31页 |
| 1.2.3 噬菌体表面展示 | 第31-32页 |
| 1.2.4 无细胞展示技术 | 第32-33页 |
| 1.3 定向进化研究进展 | 第33-38页 |
| 1.3.1 定向进化概述 | 第33-34页 |
| 1.3.2 基因突变库的构建方法 | 第34-36页 |
| 1.3.3 突变文库的高通量筛选策略 | 第36-38页 |
| 1.4 定向进化在免疫学方面的应用 | 第38-40页 |
| 1.4.1 通过定向进化抗体亲和力成熟 | 第38-39页 |
| 1.4.2 定向进化改善抗原的免疫原性以及免疫保护力 | 第39-40页 |
| 1.4.3 通过定向进化鉴定靶向配体 | 第40页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第40-42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-65页 |
| 2.1 试验材料 | 第42-43页 |
| 2.1.1 试验菌株、寄生虫株与载体 | 第42-43页 |
| 2.1.2 试验动物 | 第43页 |
| 2.1.3 主要试剂与药品 | 第43页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第43页 |
| 2.1.5 试剂的配制 | 第43页 |
| 2.2 试验方法 | 第43-65页 |
| 2.2.1 试验设计 | 第43-45页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第45页 |
| 2.2.3 球虫RNA的提取 | 第45-46页 |
| 2.2.4 EtMIC2基因的PCR扩增 | 第46页 |
| 2.2.5 EtMIC2氨基酸序列同源比对分析 | 第46页 |
| 2.2.6 EtMIC2基因的克隆 | 第46-47页 |
| 2.2.7 易错PCR扩增EtMIC2基因 | 第47-48页 |
| 2.2.8 EtMIC2基因突变库的克隆 | 第48-49页 |
| 2.2.9 突变EtMIC2基因库的鉴定 | 第49页 |
| 2.2.10 EtMIC2基因库的建立 | 第49页 |
| 2.2.11 酵母表面展示重组质粒的构建 | 第49-51页 |
| 2.2.12 重组质粒转染酿酒酵母EBY100 | 第51-52页 |
| 2.2.13 变异蛋白质库诱导表达 | 第52页 |
| 2.2.14 免疫荧光检测变异蛋白质展示 | 第52页 |
| 2.2.15 SDS-PAGE和Western blot检测EtMIC2的展示表达 | 第52-55页 |
| 2.2.16 FACS筛选目的变异蛋白质 | 第55页 |
| 2.2.17 筛选后变异株鉴定 | 第55-57页 |
| 2.2.18 变异蛋白质的原核表达系统的构建 | 第57-58页 |
| 2.2.19 原核蛋白质诱导表达及纯化 | 第58-60页 |
| 2.2.20 亚单位疫苗制备 | 第60页 |
| 2.2.21 球虫卵囊活化 | 第60-61页 |
| 2.2.22 鸡球虫感染试验设计 | 第61-63页 |
| 2.2.23 血清和黏膜抗体的检测 | 第63-64页 |
| 2.2.24 鸡淋巴细胞增殖试验 | 第64页 |
| 2.2.25 淋巴细胞亚群检测 | 第64-65页 |
| 3 试验结果 | 第65-89页 |
| 3.1 基因突变库的构建 | 第65-71页 |
| 3.1.1 EtMIC2氨基酸序列分析 | 第65页 |
| 3.1.2 T1-EtMIC2重组质粒的构建 | 第65-66页 |
| 3.1.3 EtMIC2基因突变库的构建 | 第66-67页 |
| 3.1.4 突变的EtMIC2基因的序列测定及分析 | 第67-71页 |
| 3.2 蛋白质突变库的构建 | 第71-72页 |
| 3.2.1 变异EtMIC2蛋白质库的酵母展示重组质粒构建 | 第71页 |
| 3.2.2 EtMIC2蛋白质突变库表面展示 | 第71-72页 |
| 3.2.3 展示EtMIC2蛋白质Western blot鉴定 | 第72页 |
| 3.3 FACS筛选目的突变体 | 第72-77页 |
| 3.3.1 流式细胞仪筛选展示变异蛋白质的EBY100酵母菌菌株 | 第72-73页 |
| 3.3.2 筛选的EtMIC2变异蛋白质的序列测定 | 第73-75页 |
| 3.3.3 七株突变EtMIC2蛋白质的表面展示效果分析 | 第75-76页 |
| 3.3.4 EtMIC2变异蛋白质氨基酸突变类型分析 | 第76-77页 |
| 3.4 变异蛋白质的原核表达 | 第77-80页 |
| 3.4.1 变异蛋白质的原核表达及纯化 | 第77-79页 |
| 3.4.2 变异蛋白质Western blot检测 | 第79页 |
| 3.4.3 变异蛋白质浓度测定 | 第79-80页 |
| 3.5 变异蛋白质免疫保护效果评价 | 第80-89页 |
| 3.5.1 体重增长 | 第80-81页 |
| 3.5.2 卵囊排出 | 第81-82页 |
| 3.5.3 盲肠病变积分 | 第82-83页 |
| 3.5.4 抗球虫指数(ACI) | 第83页 |
| 3.5.5 外周血T淋巴细胞增值试验 | 第83-84页 |
| 3.5.6 CD4~+和CD8~+T淋巴细胞亚群的检测结果 | 第84-86页 |
| 3.5.7 血清IgG抗体检测 | 第86-87页 |
| 3.5.8 盲肠黏膜sIgA抗体水平检测结果 | 第87-89页 |
| 4 讨论 | 第89-97页 |
| 5 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-113页 |
| 附录 | 第113-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 攻读学位期间论文发表情况 | 第117页 |
