| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 东方粘虫概述 | 第13页 |
| 1.2 V-ATP酶的概述 | 第13-16页 |
| 1.2.1 V-ATPase的结构 | 第13-14页 |
| 1.2.2 V-ATPase的功能 | 第14-15页 |
| 1.2.3 昆虫V-ATP酶 | 第15-16页 |
| 1.3 原核表达系统的概述 | 第16-18页 |
| 1.3.1 表达载体 | 第17页 |
| 1.3.2 宿主菌 | 第17-18页 |
| 1.4 多克隆抗体的概述 | 第18-19页 |
| 1.4.1 多克隆抗体的制备 | 第18页 |
| 1.4.2 影响抗体的因素 | 第18-19页 |
| 1.4.3 多克隆抗体的应用 | 第19页 |
| 1.5 本论文的选题、研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 1.6 本论文的设计思路 | 第20-22页 |
| 第二章 东方粘虫V-ATP酶a、d和C亚基基因全长的克隆 | 第22-49页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 东方粘虫总RNA的提取及检测 | 第23页 |
| 2.2.2 引物设计与合成 | 第23-24页 |
| 2.2.3 V-ATP酶a、d和C亚基中间保守序列扩增 | 第24-26页 |
| 2.2.4 V-ATP酶a、d和C亚基的3'和5'-RACE扩增 | 第26-28页 |
| 2.2.5 In-Fusion克隆RACE产物及检测 | 第28-29页 |
| 2.2.6 全长序列获得与验证 | 第29页 |
| 2.2.7 基因序列分析及系统进化性分析 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-47页 |
| 2.3.1 东方粘虫总RNA的提取和检测 | 第30页 |
| 2.3.2 V-ATP酶a、d和C亚基中间保守序列的扩增与检测 | 第30-32页 |
| 2.3.3 东方粘虫V-ATP酶a、d和C亚基RACE扩增与检测 | 第32-38页 |
| 2.3.4 东方粘虫V-ATP酶a、C和d亚基cDNA全长序列分析 | 第38-41页 |
| 2.3.5 同源性及系统进化分析 | 第41-47页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 东方粘虫V-ATP酶a、d和C亚基原核表达体系的建立 | 第49-63页 |
| 3.1 试验材料 | 第49-51页 |
| 3.1.1 供试昆虫 | 第49页 |
| 3.1.2 供试菌株和质粒 | 第49页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第49页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第49-50页 |
| 3.1.5 主要试剂的制备 | 第50-51页 |
| 3.2 试验方法 | 第51-56页 |
| 3.2.1 东方粘虫中肠总RNA的提取及检测 | 第51页 |
| 3.2.2 反转录合成cDNA第一链 | 第51页 |
| 3.2.3 目的基因片段的扩增 | 第51-52页 |
| 3.2.4 原核表达载体pET-22b(+)质粒的提取 | 第52页 |
| 3.2.5 目的基因与pET-22b(+)质粒的双酶切及回收 | 第52-53页 |
| 3.2.6 目的片段与载体骨架的连接反应 | 第53页 |
| 3.2.7 连接产物的转化及检测 | 第53页 |
| 3.2.8 重组质粒的转化及检测 | 第53-54页 |
| 3.2.9 重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第54-55页 |
| 3.2.10 目标蛋白的纯化及透析处理 | 第55页 |
| 3.2.11 目标蛋白的Western Blot检测 | 第55-56页 |
| 3.3 结果与分析 | 第56-61页 |
| 3.3.1 MS-VATPa、MS-VATPd和MS-VATPC基因的扩增及鉴定 | 第56页 |
| 3.3.2 重组表达载体的构建与鉴定 | 第56-58页 |
| 3.3.3 重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第58-60页 |
| 3.3.4 纯化蛋白的SDS-PAGE及Western Blot检测 | 第60-61页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 东方粘虫V-ATP酶d和C亚基多克隆抗体的制备 | 第63-69页 |
| 4.1 试验材料 | 第63-64页 |
| 4.1.1 动物材料 | 第63页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第63页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第63页 |
| 4.1.4 主要试剂的制备 | 第63-64页 |
| 4.2 试验方法 | 第64-65页 |
| 4.2.1 重组质粒的诱导表达及纯化 | 第64页 |
| 4.2.2 融合蛋白的SDS-PAGE和Western Blot检测 | 第64页 |
| 4.2.3 MS-VATPd和MS-VATPC蛋白的浓度测定 | 第64页 |
| 4.2.4 多克隆抗体的制备 | 第64页 |
| 4.2.5 ELISA法检测抗血清的效价 | 第64-65页 |
| 4.2.6 多克隆抗体的Western Blot检测 | 第65页 |
| 4.3 结果与分析 | 第65-67页 |
| 4.3.1 融合蛋白的SDS-PAGE及Western Blot检测 | 第65-66页 |
| 4.3.2 ELISA法检测抗血清的效价 | 第66-67页 |
| 4.3.3 Western Blot检测鼠抗MS-VATPC多克隆抗体的特异性 | 第67页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 结论 | 第69-70页 |
| 5.1 主要结论 | 第69页 |
| 5.2 主要创新点 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 附录 | 第76-79页 |
| 缩略词 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81页 |
