| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 英文缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-33页 |
| 1.1 奶牛酵母样真菌性乳房炎 | 第16-20页 |
| 1.1.1 奶牛酵母样真菌性乳房炎概述 | 第16-17页 |
| 1.1.2 奶牛酵母样真菌性乳房炎的病因 | 第17-18页 |
| 1.1.3 奶牛酵母样真菌性乳房炎的临床特征 | 第18页 |
| 1.1.4 奶牛酵母样真菌性乳房炎的流行病学调查 | 第18-19页 |
| 1.1.5 奶牛酵母样真菌性乳房炎的诊断 | 第19-20页 |
| 1.1.6 奶牛酵母样真菌性乳房炎的防治 | 第20页 |
| 1.2 白色念珠菌 | 第20-25页 |
| 1.2.1 白色念珠菌的生物学特性 | 第20-21页 |
| 1.2.2 白色念珠菌诊断方法概述 | 第21-25页 |
| 1.3 实时荧光定量PCR(qPCR)技术 | 第25-31页 |
| 1.3.1 荧光定量PCR技术的原理 | 第25-26页 |
| 1.3.2 荧光定量PCR技术的分类 | 第26-28页 |
| 1.3.3 荧光定量PCR技术的定量方法 | 第28-29页 |
| 1.3.4 融解曲线分析 | 第29-30页 |
| 1.3.5 荧光定量PCR技术在兽医学中的应用 | 第30-31页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第31-33页 |
| 第二章 南宁市某奶牛场奶牛乳房炎酵母样真菌的分离鉴定及药敏试验 | 第33-43页 |
| 2.1 试验材料 | 第33-34页 |
| 2.1.1 试验试剂 | 第33页 |
| 2.1.2 试验设备 | 第33-34页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第34页 |
| 2.2 试验方法 | 第34-36页 |
| 2.2.1 乳样的来源 | 第34页 |
| 2.2.2 乳样的采集 | 第34-35页 |
| 2.2.3 乳样的分装 | 第35页 |
| 2.2.4 乳样的SCC检测 | 第35页 |
| 2.2.5 乳样酵母样真菌的分离 | 第35页 |
| 2.2.6 乳样酵母样真菌的鉴定 | 第35页 |
| 2.2.7 菌种的保存 | 第35-36页 |
| 2.2.8 临床分离酵母样真菌菌株的药敏试验 | 第36页 |
| 2.2.9 数据统计分析 | 第36页 |
| 2.3 结果 | 第36-40页 |
| 2.3.1 乳样SCC检测结果 | 第36-37页 |
| 2.3.2 乳样中酵母样真菌分离结果 | 第37-38页 |
| 2.3.3 乳样中酵母样真菌鉴定结果 | 第38-40页 |
| 2.3.4 临床分离酵母样真菌菌株药敏试验结果 | 第40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 奶牛乳房炎白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR技术检测方法的建立与应用 | 第43-64页 |
| 3.1 材料 | 第43-46页 |
| 3.1.1 试验菌株 | 第43页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第43-44页 |
| 3.1.3 试验设备 | 第44页 |
| 3.1.4 试验试剂配方 | 第44-46页 |
| 3.2 试验方法 | 第46-51页 |
| 3.2.1 白色念珠菌标准菌株的活化 | 第46页 |
| 3.2.2 菌株DNA模板的提取 | 第46页 |
| 3.2.3 引物的设计 | 第46-47页 |
| 3.2.4 普通PCR反应体系的建立 | 第47页 |
| 3.2.5 普通PCR产物的鉴定 | 第47页 |
| 3.2.6 普通PCR产物胶回收 | 第47-48页 |
| 3.2.7 pEasy-T1载体连接和转化 | 第48-49页 |
| 3.2.8 质粒的提取 | 第49页 |
| 3.2.9 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR反应标准品的制备、标准曲线的制作及融解曲线的建立 | 第49-50页 |
| 3.2.10 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR检测方法的特异性试验 | 第50页 |
| 3.2.11 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR检测方法的敏感性试验 | 第50页 |
| 3.2.12 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR检测方法的重复性试验 | 第50-51页 |
| 3.2.13 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR检测方法临床样品检测的初步应用 | 第51页 |
| 3.2.14 数据统计分析 | 第51页 |
| 3.3 结果 | 第51-60页 |
| 3.3.1 白色念珠菌PCR反应退火温度优化结果 | 第51-52页 |
| 3.3.2 PCR扩增产物的验证 | 第52-53页 |
| 3.3.3 重组质粒PCR鉴定结果 | 第53-54页 |
| 3.3.4 白色念珠菌部分核酸序列重组质粒测序结果 | 第54页 |
| 3.3.5 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR反应的标准曲线 | 第54-55页 |
| 3.3.6 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR反应的融解曲线 | 第55-56页 |
| 3.3.7 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR检测方法的特异性试验结果 | 第56页 |
| 3.3.8 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR检测方法的敏感性试验结果 | 第56-58页 |
| 3.3.9 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR检测方法的重复性试验结果 | 第58-59页 |
| 3.3.10 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR方法的临床样本检测试验结果 | 第59-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-64页 |
| 3.4.1 建立SYBR Green-I荧光定量PCR方法检测乳房炎白色念珠菌的重要性 | 第60页 |
| 3.4.2 白色念珠菌目的基因的选择 | 第60-61页 |
| 3.4.3 白色念珠菌DNA的提取 | 第61页 |
| 3.4.4 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR反应的融解曲线分析 | 第61-62页 |
| 3.4.5 白色念珠菌SYBR Green-I荧光定量PCR方法的灵敏性、特异性、重复性及临床检测结果分析 | 第62-63页 |
| 3.4.6 荧光定量PCR技术诊断白色念珠菌 | 第63-64页 |
| 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
