| 致谢 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-27页 |
| 1 昆虫的营养消化和吸收 | 第17-18页 |
| 2 鳞翅目昆虫消化酶 | 第18页 |
| 3 丝氨酸蛋白酶 | 第18-23页 |
| 3.1 胰蛋白酶 | 第19-20页 |
| 3.2 胰凝乳蛋白酶 | 第20-23页 |
| 4 丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第23-24页 |
| 5 寄生蜂对寄主代谢的调控 | 第24-27页 |
| 5.1 寄生蜂的分类和基本调控作用 | 第24-25页 |
| 5.2 寄生蜂对寄主的营养代谢的调控 | 第25-27页 |
| 第二章 基本材料与方法 | 第27-38页 |
| 1 养虫设备 | 第27-28页 |
| 1.1 全自动人工气候室 | 第27页 |
| 1.2 智能人工气候箱 | 第27页 |
| 1.3 养虫笼 | 第27页 |
| 1.4 产卵笼 | 第27页 |
| 1.5 保蜂盒及寄生盒 | 第27页 |
| 1.6 吸虫管 | 第27-28页 |
| 2 供试材料 | 第28页 |
| 2.1 供试蔬菜 | 第28页 |
| 3 供试昆虫的人工饲养 | 第28-29页 |
| 3.1. 虫源 | 第28页 |
| 3.2 小菜蛾的饲养 | 第28页 |
| 3.3 寄生蜂的饲养 | 第28-29页 |
| 4 实验仪器及软件系统 | 第29-30页 |
| 4.1 实验仪器 | 第29页 |
| 4.2 软件系统 | 第29-30页 |
| 5 常用实验试剂及配制 | 第30-31页 |
| 5.1 工具酶及试剂盒 | 第30页 |
| 5.2 其它试剂 | 第30页 |
| 5.3 一般试剂的配制 | 第30-31页 |
| 6 常规实验方法 | 第31-38页 |
| 6.1 小菜蛾幼虫中肠组织的收集 | 第31页 |
| 6.2 小菜蛾幼虫中肠RNA的提取 | 第31-33页 |
| 6.2.1 TRIzoL法提取总RNA | 第31-32页 |
| 6.2.2 使用SV Total RNA isolation kit(Promega)提取总RNA | 第32-33页 |
| 6.3 cDNA第一链的合成 | 第33-34页 |
| 6.3.1 SMART MMLV Reverse Transcriptase (Clonteth,Fermentas) | 第33页 |
| 6.3.2 ReverTra Ace qPCR RT Kit | 第33-34页 |
| 6.4 PCR反应 | 第34页 |
| 6.5 氯化钙制备新鲜的感受态细胞 | 第34页 |
| 6.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| 6.7 凝胶回收目的片段 | 第35页 |
| 6.8 连接反应 | 第35页 |
| 6.9 转化与活化 | 第35-36页 |
| 6.9.1 电转法 | 第35页 |
| 6.9.2 热激法 | 第35-36页 |
| 6.10 质粒提取 | 第36页 |
| 6.11 3’、5’末端快速扩增(RACE) | 第36页 |
| 6.12 荧光定量PCR | 第36-38页 |
| 第三章 小菜蛾幼虫中肠中丝氨酸蛋白酶基因的克隆和系统进化分析 | 第38-52页 |
| 1 材料与方法 | 第38-41页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第38页 |
| 1.2 小菜蛾幼虫中肠组织的收集 | 第38页 |
| 1.3 小菜蛾幼虫中肠RNA的提取 | 第38页 |
| 1.4 引物设计 | 第38-40页 |
| 1.5 RACE | 第40页 |
| 1.6 产物纯化、连接T载体及鉴定 | 第40页 |
| 1.7 生物信息学分析 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-50页 |
| 2.1 核心cDNA片段 | 第41-42页 |
| 2.2 Pxsp-A全长cDNA及DNA序列分析 | 第42-43页 |
| 2.3 Pxsp-B全长cDNA及DNA序列分析 | 第43-45页 |
| 2.4 Pxsp-C全长cDNA及DNA序列分析 | 第45页 |
| 2.5 Pxsp-D全长cDNA及DNA序列分析 | 第45-47页 |
| 2.6 系统进化分析 | 第47-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 丝氨酸蛋白酶在小菜蛾不同发育阶段的转录规律 | 第52-61页 |
| 1 材料与方法 | 第52-54页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第52页 |
| 1.2 小菜蛾幼虫中肠组织的收集 | 第52页 |
| 1.3 小菜蛾幼虫中肠RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第52页 |
| 1.4 实时荧光定量rt-qPCR检测 | 第52-54页 |
| 1.4.1 引物设计 | 第52-53页 |
| 1.4.2 引物扩增效率的检测 | 第53页 |
| 1.4.3 丝氨酸蛋白酶在小菜蛾不同龄期的表达 | 第53-54页 |
| 1.4.4 荧光定量PCR的数据统计与结果分析 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-59页 |
| 2.1 引物的特异性和扩增效率 | 第54页 |
| 2.2 丝氨酸蛋白酶在小菜蛾不同发育阶段的转录规律 | 第54-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 菜蛾盘绒茧蜂寄生对丝氨酸蛋白酶在寄主小菜蛾体内转录的调控 | 第61-67页 |
| 1 材料与方法 | 第61-62页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第61页 |
| 1.2 小菜蛾幼虫中肠组织的收集 | 第61页 |
| 1.3 小菜蛾幼虫中肠RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第61页 |
| 1.4 实时荧光定量rt-qPCR检测 | 第61-62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-65页 |
| 3 讨论 | 第65-67页 |
| 第六章 丝氨酸蛋白酶抑制剂对寄主小菜蛾酶活性的影响 | 第67-72页 |
| 1 材料与方法 | 第67-68页 |
| 1.1 中肠总丝氨酸蛋白酶酶活的测定 | 第67页 |
| 1.2 中肠类胰蛋白酶酶活的测定 | 第67-68页 |
| 1.3 中肠类胰凝乳蛋白酶酶活的测定 | 第68页 |
| 1.4 蛋白酶抑制剂对中肠蛋白酶活性的影响 | 第68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| 第七章 总讨论 | 第72-76页 |
| 1 结论与讨论 | 第72-74页 |
| 2 本文创新之处 | 第74-75页 |
| 3 本文不足之处 | 第75页 |
| 4 今后研究方向 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-87页 |
| 附表 | 第87页 |
