| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 脑源性神经营养因子 | 第10-14页 |
| 1.1.1 脑源性神经营养因子概述 | 第10页 |
| 1.1.2 脑源性神经营养因子作用机制 | 第10-12页 |
| 1.1.3 脑源性神经营养因子研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2 脂肪间充质干细胞 | 第14-17页 |
| 1.2.1 脂肪干细胞定义及研究意义 | 第14-15页 |
| 1.2.2 脂肪干细胞生物学特性 | 第15-17页 |
| 1.3 基因治疗与干细胞治疗 | 第17-18页 |
| 1.3.1 基因治疗 | 第17-18页 |
| 1.3.2 干细胞治疗 | 第18页 |
| 1.3.3 基因治疗与干细胞治疗应用 | 第18页 |
| 1.4 论文的选题依据及研究内容 | 第18-20页 |
| 2 脂肪间充质干细胞的分离、培养与鉴定 | 第20-32页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第20-24页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第20页 |
| 2.1.2 实验药品与试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验所需试剂配制 | 第21-24页 |
| 2.1.4 实验仪器与设备 | 第24页 |
| 2.2 ADSCs鉴定 | 第24-27页 |
| 2.2.1 ADSCs的分离培养 | 第24-25页 |
| 2.2.2 ADSCs传代培养 | 第25页 |
| 2.2.3 ADSCs冻存及解冻 | 第25-26页 |
| 2.2.4 ADSCs表面标志鉴定 | 第26页 |
| 2.2.5 ADSCs成脂分化与成骨分化 | 第26页 |
| 2.2.6 生长曲线测定 | 第26-27页 |
| 2.2.7 菌落形成单位测试 | 第27页 |
| 2.2.8 划痕实验 | 第27页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第27-31页 |
| 2.3.1 生长曲线结果 | 第27-28页 |
| 2.3.2 表面标志测定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 ADSCs成骨成脂分化染色结果 | 第29页 |
| 2.3.4 集落形成单位 | 第29-30页 |
| 2.3.5 划痕实验 | 第30-31页 |
| 2.4 本章小结 | 第31-32页 |
| 3 BDNF-ADSCs筛选及干细胞检测 | 第32-47页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第33-34页 |
| 3.1.1 实验药品与试剂 | 第33页 |
| 3.1.2 实验仪器与设备 | 第33页 |
| 3.1.3 实验所需试剂配制 | 第33-34页 |
| 3.2 ADSCs慢病毒转染 | 第34-35页 |
| 3.2.1 MOI测定方法 | 第34-35页 |
| 3.2.2 慢病毒转染 | 第35页 |
| 3.3 流式细胞仪筛选 | 第35-40页 |
| 3.3.1 上样前准备 | 第35-36页 |
| 3.3.2 光路调节和QC | 第36-37页 |
| 3.3.3 样本获取和分析 | 第37页 |
| 3.3.4 BDND-ADSCs的荧光筛选 | 第37-40页 |
| 3.4 G418药物筛选 | 第40-42页 |
| 3.4.1 G418预筛选 | 第40-41页 |
| 3.4.2 G418正式筛选 | 第41页 |
| 3.4.3 筛选结果分析 | 第41-42页 |
| 3.5 干细胞性能测试 | 第42-46页 |
| 3.5.1 ADSCs和BDNF-ADSCs表面标志 | 第42页 |
| 3.5.2 体外分化潜能测试 | 第42-44页 |
| 3.5.3 细胞增殖曲线测定 | 第44-45页 |
| 3.5.4 细胞集落实验测定 | 第45-46页 |
| 3.6 本章小结 | 第46-47页 |
| 4 BDNF-ADSCs mRNA与蛋白表达量检测 | 第47-61页 |
| 4.1 实验材料和方法 | 第47-52页 |
| 4.1.1 实验药品与试剂. | 第47-48页 |
| 4.1.2 实验所需试剂配制 | 第48-51页 |
| 4.1.3 实验仪器与设备 | 第51-52页 |
| 4.2 实验结果与分析 | 第52-56页 |
| 4.2.1 mRNA的提取 | 第52-53页 |
| 4.2.2 反转录PCR | 第53页 |
| 4.2.3 实时荧光定量PCR检测mRNA表达含量 | 第53-54页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR检测结果分析 | 第54-56页 |
| 4.3 蛋白质免疫印迹 | 第56-60页 |
| 4.3.1 蛋白的提取与蛋白含量的测定 | 第56-57页 |
| 4.3.2 蛋白分离电泳实验 | 第57-58页 |
| 4.3.3 蛋白转膜与孵育 | 第58-59页 |
| 4.3.4 Western-blot显影及分析 | 第59-60页 |
| 4.4 本章小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-63页 |
| 创新点与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 中英文缩略词表 | 第71-73页 |
| 附录A 合成引物序列 | 第73-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
