| 前言 | 第16-19页 |
| 第一篇 文献综述 | 第19-54页 |
| 第一章 精原干细胞的起源、数量及生物学特性 | 第19-28页 |
| 1 SSCs 的起源 | 第19-20页 |
| 2 SSCs 的数量 | 第20页 |
| 3 SSCs 的生物学特性 | 第20-27页 |
| 3.1 具有发育微环境 | 第20-21页 |
| 3.2 具有自增殖潜能与分化潜能 | 第21-23页 |
| 3.3 具有较独特的形态学特征 | 第23-25页 |
| 3.4 具有不确定的细胞周期 | 第25页 |
| 3.5 具有迁移能力 | 第25页 |
| 3.6 具有特异性的分子标记 | 第25-26页 |
| 3.7 具有较特异的荧光染料染色特性 | 第26-27页 |
| 3.8 具有较高的端粒酶活性 | 第27页 |
| 4 结语 | 第27-28页 |
| 第二章 精原干细胞的分离富集及检测鉴定 | 第28-35页 |
| 1 生精上皮细胞悬液的获取 | 第28-30页 |
| 1.1 生精上皮细胞发育过程及特点 | 第28-29页 |
| 1.2 睾丸组织细胞的解离 | 第29页 |
| 1.3 生精上皮细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2 SSCs 的分离纯化 | 第30-33页 |
| 2.1 不连续 Percoll 密度梯度离心法 | 第31页 |
| 2.2 单位重力沉降法 | 第31页 |
| 2.3 流式细胞分选术 | 第31-32页 |
| 2.4 免疫磁珠分离技术 | 第32页 |
| 2.5 盘化法 | 第32-33页 |
| 3 SSCs 的检测鉴定 | 第33-35页 |
| 3.1 形态学法 | 第33-34页 |
| 3.2 表面标志法或荧光染色法 | 第34页 |
| 3.3 综合排除法 | 第34页 |
| 3.4 SSCs 移植功能性检测法 | 第34-35页 |
| 第三章 精原干细胞的体外培养、建系及冷冻保存 | 第35-45页 |
| 1 SSCs 体外培养的影响因素 | 第35-42页 |
| 1.1 培养基及血清 | 第35-36页 |
| 1.2 添加剂、激素和维生素的应用 | 第36-37页 |
| 1.3 生长因子 | 第37-40页 |
| 1.4 与支持细胞共培养 | 第40-41页 |
| 1.5 饲养层细胞的利用 | 第41页 |
| 1.6 培养温度的确定 | 第41-42页 |
| 2 SSCs 的长期培养及建系 | 第42-44页 |
| 2.1 病毒感染法 | 第42-43页 |
| 2.2 端粒酶永生化法 | 第43页 |
| 2.3 正常传代法 | 第43-44页 |
| 3 SSCs 的冷冻保存 | 第44-45页 |
| 第四章 精原干细胞/睾丸组织移植及生精上皮细胞介导的转基因 | 第45-54页 |
| 1 SSCs 移植 | 第45-51页 |
| 1.1 供体和受体动物的准备 | 第46页 |
| 1.2 供体 SSCs 在受体睾丸内的克隆过程 | 第46-47页 |
| 1.3 SSCs 移植后克隆效率的影响因素 | 第47-48页 |
| 1.4 SSCs 移植的应用 | 第48-49页 |
| 1.5 异种(源)SSCs 移植 | 第49-50页 |
| 1.6 SSC 移植与不育及基因敲除研究 | 第50-51页 |
| 2 SSCs 介导的基因转移 | 第51-52页 |
| 2.1 体内途径 | 第51页 |
| 2.2 体外途径 | 第51-52页 |
| 3 睾丸组织移植 | 第52-53页 |
| 4 睾丸支持细胞介导的基因转移 | 第53页 |
| 5 展望 | 第53-54页 |
| 第二篇 研究内容 | 第54-121页 |
| 第一章 小鼠精原干细胞的分离富集及睾丸提取液、EGF、E2 对其体外培养的影响 | 第54-72页 |
| 1 材料与方法 | 第54-62页 |
| 1.1 材料 | 第54-55页 |
| 1.2 方法 | 第55-62页 |
| 2 结果 | 第62-68页 |
| 2.1 生精上皮的消化效果 | 第62页 |
| 2.2 Percoll 法的分离效果 | 第62-63页 |
| 2.3 盘化法的分离效果 | 第63-64页 |
| 2.4 SSCs 的体外形态学特征 | 第64页 |
| 2.5 SSCs 的细胞化学及免疫细胞化学特性 | 第64页 |
| 2.6 不同条件下 SSCs 的存活时间及增殖行为 | 第64-68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| 3.1 小鼠生精细胞单细胞悬液制备的影响因素 | 第68-69页 |
| 3.2 Percoll 法的分离效果 | 第69页 |
| 3.3 盘化法的特点及分离效果 | 第69-70页 |
| 3.4 睾丸提取液、EGF、E2 对 SSCs 体外存活及增殖能力的影响 | 第70-71页 |
| 4 小结 | 第71-72页 |
| 第二章 小鼠GDNF cDNA 在STO 细胞中的稳定表达 | 第72-87页 |
| 1 材料与方法 | 第72-81页 |
| 1.1 材料 | 第72-73页 |
| 1.2 方法 | 第73-81页 |
| 2 结果 | 第81-82页 |
| 2.1 pcDNA3-mGDNF 的酶切图谱 | 第81页 |
| 2.2 pcDNA3-mGDNF 的序列测定 | 第81页 |
| 2.3 G418 对 STO 的最小致死剂量 | 第81-82页 |
| 2.4 总 RNA 提取结果 | 第82页 |
| 2.5 STOGDNF 的 PCR 鉴定 | 第82页 |
| 2.6 STOGDNF 的 RT-PCR 鉴定 | 第82页 |
| 2.7 STOGDNF 的免疫细胞化学鉴定 | 第82页 |
| 3 讨论 | 第82-86页 |
| 3.1 转染方法的选择 | 第84页 |
| 3.2 脂质体介导的转染的原理及效果 | 第84-85页 |
| 3.3 mGDNF cDNA 在 STO 细胞中的成功整合、转录和表达 | 第85页 |
| 3.4 真核基因在哺乳动物细胞中表达水平的影响因素 | 第85-86页 |
| 4 小结 | 第86-87页 |
| 第三章 STOGDNF 饲养层促进精原干细胞的体外存活和增殖 | 第87-97页 |
| 1 材料与方法 | 第87-89页 |
| 1.1 材料 | 第87页 |
| 1.2 方法 | 第87-89页 |
| 2 结果 | 第89-94页 |
| 2.1 不同培养条件下 SSCs 的存活及增殖行为 | 第89页 |
| 2.2 不同培养条件下 SSCs 的数量 | 第89-90页 |
| 2.3 培养过程中 SSCs 的细胞化学和免疫细胞化学特性 | 第90-94页 |
| 3 讨论 | 第94-96页 |
| 3.1 使用饲养层的必要性 | 第94-95页 |
| 3.2 GDNF 是小鼠 SSCs 自增殖调节的关键因子之一 | 第95页 |
| 3.3 STOGDNF 表达产物的生物学活性及其优越性 | 第95-96页 |
| 4 小结 | 第96-97页 |
| 第四章 逆转录病毒载体 PLNC-tPA、PL-tPA-SN 的构建、包装及滴定 | 第97-108页 |
| 1 材料与方法 | 第97-102页 |
| 1.1 材料 | 第97-98页 |
| 1.2 方法 | 第98-102页 |
| 2 结果 | 第102-104页 |
| 2.1 重组逆转录病毒载体 PLNC-tPA 及 PL-tPA-SN 的酶切鉴定 | 第102页 |
| 2.2 G418 对PA317 和NIH-3T3 的最小致死剂量 | 第102-103页 |
| 2.3 稳定产毒 PA317 细胞株的获得及病毒上清的收集 | 第103页 |
| 2.4 稳定产毒 PA317 细胞株培养上清中的病毒滴度 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-107页 |
| 3.1 逆转录病毒载体的构建原理 | 第104-106页 |
| 3.2 PA317 及 NIH-3T3 的背景及特性 | 第106页 |
| 3.3 包装细胞的产毒效果及其影响因素 | 第106-107页 |
| 4 小结 | 第107-108页 |
| 第五章 精原干细胞的体外转染(或感染)及移植 | 第108-121页 |
| 1 材料与方法 | 第108-114页 |
| 1.1 材料 | 第108-109页 |
| 1.2 方法 | 第109-114页 |
| 2 结果 | 第114-117页 |
| 2.1 腹腔注射白消胺对小鼠睾丸的影响 | 第114页 |
| 2.2 转染(或感染)后 SSCs 的形态学及生长行为 | 第114-115页 |
| 2.3 受体睾丸的注射效果 | 第115页 |
| 2.4 受体鼠的存活数及其睾丸/组织的形态学分析 | 第115页 |
| 2.5 受体睾丸基因组 DNA 的 PCR 结果 | 第115-117页 |
| 3 讨论 | 第117-120页 |
| 3.1 白消胺注射剂量的确定 | 第117-118页 |
| 3.2 SSCs 异体移植后的免疫排斥 | 第118-119页 |
| 3.3 SSCs 体外转染(或感染)的适宜方法 | 第119-120页 |
| 4 小结 | 第120-121页 |
| 结论 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-138页 |
| 攻博期间发表的论文及其它成果 | 第138-140页 |
| 致谢 | 第140-142页 |
| 中文摘要 | 第142-147页 |
| 英文摘要 | 第147-141页 |
| 导师及作者简介 | 第141-153页 |
