| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-17页 |
| 1.1 木薯简介 | 第10页 |
| 1.2 植物抗干旱胁迫研究现状 | 第10-13页 |
| 1.2.1 干旱胁迫对植物的生理影响 | 第10页 |
| 1.2.2 植物的抗旱机理 | 第10-11页 |
| 1.2.3 木薯抗干旱胁迫研究现状 | 第11-13页 |
| 1.3 响应干旱胁迫miRNA研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3.1 miRNA简介 | 第13-14页 |
| 1.3.2 干旱胁迫响应miRNA研究进展 | 第14页 |
| 1.3.3 木薯中干旱胁迫响应miRNA | 第14-15页 |
| 1.4 谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase,GST)基因研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4.1 GSTs基因简介 | 第15页 |
| 1.4.2 GSTs基因与逆境胁迫 | 第15-16页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第17页 |
| 2.2 干旱胁迫实验 | 第17页 |
| 2.3 实验流程 | 第17-18页 |
| 2.4 木薯干旱胁迫响应miRNA及其靶基因筛选 | 第18页 |
| 2.5 生理指标调查与数据分析方法 | 第18-19页 |
| 2.5.1 光合指标的测定 | 第18-19页 |
| 2.5.2 株高变化量 | 第19页 |
| 2.5.3 叶绿素含量(SPAD值) | 第19页 |
| 2.5.4 数据处理 | 第19页 |
| 2.6 MemiR-162a表达量分析 | 第19-21页 |
| 2.6.1 木薯总RNA提取 | 第19-20页 |
| 2.6.2 RT引物以及定量引物设计 | 第20页 |
| 2.6.3 cDNA第一链反转录 | 第20页 |
| 2.6.4 荧光实时定量PCR | 第20-21页 |
| 2.7 靶基因MeGSTU7表达量分析 | 第21-22页 |
| 2.7.1 RT引物及定量引物设计 | 第21页 |
| 2.7.2 RNA提取 | 第21-22页 |
| 2.7.3 cDNA第一链反转录 | 第22页 |
| 2.7.4 cDNA第一链的检测 | 第22页 |
| 2.7.5 荧光定量PCR | 第22页 |
| 2.8 RACE法确定MemiR-162a对其靶基因MeGSTU7的切割位点 | 第22-27页 |
| 2.8.1 实验原理 | 第22页 |
| 2.8.2 材料 | 第22-23页 |
| 2.8.3 mRNA的分离 | 第23页 |
| 2.8.4 mRNA与Oligo连接(GeneRacerTM RNA Oligo) | 第23-24页 |
| 2.8.5 mRNA反转录成CDNA(SuperScript~(TM) Ⅲ) | 第24页 |
| 2.8.6 cDNA第一链PCR反应 | 第24-25页 |
| 2.8.7 第二轮巢式PCR扩增 | 第25页 |
| 2.8.8 PCR特异片段的回收及纯化 | 第25-26页 |
| 2.8.9 PCR产物克隆测序 | 第26-27页 |
| 2.9 MeGSTU7基因自然变异分析 | 第27-29页 |
| 2.9.1 DNA提取 | 第27页 |
| 2.9.2 木薯GSTU7基因区DNA序列克隆 | 第27页 |
| 2.9.3 基因结构分析 | 第27-28页 |
| 2.9.4 序列多样性分析 | 第28页 |
| 2.9.5 外显子区单倍型分析 | 第28页 |
| 2.9.6 SNP与干旱表型的关联分析 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-44页 |
| 3.1 干旱胁迫下SC124与Arg7生理指标变化 | 第29-33页 |
| 3.1.1 各项光合指标的变化 | 第29-31页 |
| 3.1.1.1 净光合速率 | 第29页 |
| 3.1.1.2 蒸腾速率和气孔导度 | 第29页 |
| 3.1.1.3 水分利用率 | 第29-31页 |
| 3.1.2 株高 | 第31-32页 |
| 3.1.3 叶绿素含量 | 第32-33页 |
| 3.2 干旱胁迫下MemiR-162a及其靶基因MeGSTU7表达量分析 | 第33-34页 |
| 3.3 两个品种干旱胁迫下MeGSTU7基因表达组织特异性分析 | 第34-36页 |
| 3.4 RACE分析MemiR-162a对靶基因MeGSTU7切割位点 | 第36-37页 |
| 3.5 MeGSTU7基因自然变异分析 | 第37-44页 |
| 3.5.1 基因结构与蛋白保守结构域分析 | 第37-38页 |
| 3.5.2 单核苷酸多态性分析 | 第38-40页 |
| 3.5.3 外显子区单倍型分析及其分子进化分析 | 第40-42页 |
| 3.5.4 MeGSTU7基因区SNP与干旱表型关联分析 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 4.1 生理指标对干旱胁迫的响应 | 第44页 |
| 4.1.1 光合作用对干旱胁迫的响应 | 第44页 |
| 4.1.2 株高生长量对干旱胁迫的响应 | 第44页 |
| 4.1.3 叶绿素含量对干旱胁迫的响应 | 第44页 |
| 4.2 MemiR-162a对它的靶基因MeGSTU7的切割位点的分析 | 第44-45页 |
| 4.3 MemiR-162a及其靶基因MeGSTU7表达量对干旱胁迫的响应 | 第45页 |
| 4.3.1 miRNA的检测方法 | 第45页 |
| 4.3.2 MeGSTU7基因对干旱胁迫的响应 | 第45页 |
| 4.4 MeGSTU7是一个典型的tau类的谷胱甘肽转移酶编码基因 | 第45页 |
| 4.5 MeGSTU7基因的自然变异类型中可能存在优异等位基因 | 第45-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录 | 第52-54页 |
| 缩略语表 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
