| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-22页 |
| ·牛结核病的重要性 | 第16-17页 |
| ·牛结核病诊断方法 | 第17-18页 |
| ·细菌学检测 | 第17页 |
| ·PCR 检测方法 | 第17页 |
| ·结核菌素皮内试验 | 第17-18页 |
| ·血清学诊断 | 第18页 |
| ·IFN-γ释放试验 | 第18页 |
| ·牛分枝杆菌特异性蛋白在结核病诊断中的应用 | 第18-21页 |
| ·CFP10-ESAT6 蛋白在结核病诊断中的应用 | 第18-20页 |
| ·TB10.4 蛋白的特性 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 牛分枝杆菌TB10.4 基因的克隆、表达及纯化 | 第22-38页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·菌株和载体 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·试验所用溶液及配置 | 第22-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-29页 |
| ·牛分枝杆菌基因组DNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·引物的设计 | 第25页 |
| ·目的基因的PCR 扩增与产物回收 | 第25页 |
| ·双酶切PCR 产物及载体 | 第25-26页 |
| ·连接 | 第26-27页 |
| ·转化 | 第27页 |
| ·菌液的PCR 鉴定 | 第27-28页 |
| ·质粒双酶切鉴定 | 第28页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第28页 |
| ·目的蛋白的可溶性分析 | 第28-29页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-35页 |
| ·讨论 | 第35-38页 |
| 第三章 重组蛋白的T 细胞活性鉴定 | 第38-52页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·主要试剂耗材 | 第38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-42页 |
| ·实验动物的筛选 | 第39页 |
| ·IFN-γ释放试验检测重组蛋白T 细胞活性 | 第39-40页 |
| ·荧光定量PCR 验检测重组蛋白T 细胞活性 | 第40-41页 |
| ·豚鼠皮试试验检测重组蛋白T 细胞活性 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-50页 |
| ·IFN-γ释放试验检测重组蛋白T 细胞活性 | 第42-44页 |
| ·荧光定量PCR 检测重组蛋白T 细胞活性 | 第44-46页 |
| ·豚鼠皮试试验检测重组蛋白T 细胞活性 | 第46-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 重组蛋白的B 细胞活性鉴定 | 第52-57页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·主要试剂耗材 | 第52页 |
| ·主要试剂配置 | 第52页 |
| ·主要仪器设备 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-54页 |
| ·牛结核阳性感染牛血清的确定 | 第52-53页 |
| ·Western blot 检测重组蛋白B 细胞活性 | 第53页 |
| ·间接ELISA 检测重组蛋白B 细胞活性 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 全文结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
