| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-20页 |
| 1.1 表观遗传学概况 | 第9-11页 |
| 1.2 蛋白质翻译后修饰 | 第11-14页 |
| 1.2.1 蛋白质的甲基化修饰 | 第11-13页 |
| 1.2.2 蛋白质的泛素化修饰 | 第13-14页 |
| 1.3 UHRF1概述 | 第14-17页 |
| 1.3.1 UHRF1维持DNA甲基化 | 第14-16页 |
| 1.3.2 UHRF1与细胞周期 | 第16页 |
| 1.3.3 UHRF1翻译后修饰 | 第16-17页 |
| 1.3.4 UHRF1的功能 | 第17页 |
| 1.4 SET8概述 | 第17-20页 |
| 1.4.1 SET8蛋白水平呈细胞周期变化 | 第18页 |
| 1.4.2 SET8使组蛋白发生单甲基化 | 第18-19页 |
| 1.4.3 SET8使非组蛋白发生单甲基化 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 质粒载体 | 第20页 |
| 2.1.2 抗体 | 第20-21页 |
| 2.1.3 常用试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 常用仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-38页 |
| 2.2.1 质粒构建 | 第23-25页 |
| 2.2.2 小量质粒抽提(天根公司试剂盒) | 第25-26页 |
| 2.2.3 蛋白质免疫印迹(western blot) | 第26-28页 |
| 2.2.4 GST融合蛋白的纯化 | 第28-30页 |
| 2.2.5 免疫染色 | 第30-31页 |
| 2.2.6 DNA甲基化免疫染色 | 第31-32页 |
| 2.2.7 利用流式细胞仪分析细胞周期 | 第32页 |
| 2.2.8 免疫共沉淀反应 | 第32-33页 |
| 2.2.9 GST pull-down实验 | 第33-34页 |
| 2.2.10 体内泛素化实验 | 第34-35页 |
| 2.2.11 体外泛素化实验 | 第35-36页 |
| 2.2.12 HPLC检测基因组DNA整体甲基化水平 | 第36-38页 |
| 第三章 SET8对UHRF1在细胞周期中的稳定性调控研究 | 第38-58页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验结果 | 第38-55页 |
| 3.2.1 在细胞中将LSD1敲除后,UHRF1的蛋白水平下降 | 第38-39页 |
| 3.2.2 外源转入SET8可以使UHRF1的蛋白水平降低 | 第39-41页 |
| 3.2.3 SET8调控UHRF1蛋白水平是通过泛素途径 | 第41-42页 |
| 3.2.4 SET8调控UHRF1降解依赖其酶活性 | 第42-44页 |
| 3.2.5 UHRF1的甲基化位点为K385,主要的泛素化位点为K500 | 第44-46页 |
| 3.2.6 SET8不能调控UHRF1-K385A,UHRF1-K500A泛素化降解 | 第46页 |
| 3.2.7 UHRF1-K385A,UHRF1-K500A自身泛素化水平降低这与其和E2的相互作用有关 | 第46-48页 |
| 3.2.8 UHRF1-K385A,UHRF1-K500A在细胞周期中蛋白水平不发生变化 | 第48-51页 |
| 3.2.9 稳定细胞系UHRF1-K835A与UHRF1-WT相比,G2期的细胞数有所增加 | 第51-53页 |
| 3.2.10 在细胞中将SET8敲除,DNA甲基化水平升高 | 第53-54页 |
| 3.2.11 UHRF1-K385A和UHRF1-K500A突变体不能够恢复细胞的DNA甲基化 | 第54-55页 |
| 3.3 结果分析与讨论以及课题展望 | 第55-58页 |
| 3.3.1 课题结果总结 | 第55-56页 |
| 3.3.2 课题的展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
