| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRA打 | 第7页 |
| 第一章 研究背景及文献综述 | 第10-21页 |
| 第一节 小鼠生殖细胞发育过程简介 | 第10-13页 |
| 1.1 小鼠胚胎生殖细胞的发育过程 | 第10-11页 |
| 1.2 小鼠雌雄生殖细胞减数分裂过程 | 第11-13页 |
| 第二节 GASZ基因简介 | 第13-14页 |
| 2.1 GASZ蛋白的结构介绍 | 第13-14页 |
| 2.2 GASZ基因功能的研究 | 第14页 |
| 第三节 转录因子NRF-1简介 | 第14-17页 |
| 3.1 NRF-1的结构介绍 | 第14-15页 |
| 3.2 NRF-1的功能介绍 | 第15-17页 |
| 3.2.1 NRF-1对线粒体转录因子的作用 | 第15-16页 |
| 3.2.2 NRF-1对细胞色素c氧化酶的调节 | 第16-17页 |
| 第四节 DNA甲基化在生殖细胞发育过程中调控简介 | 第17-19页 |
| 第五节 线粒体与生殖细胞的发育简介 | 第19-21页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第21-40页 |
| 第一节 实验材料 | 第21-26页 |
| 1.1 细胞株 | 第21页 |
| 1.2 细胞培养 | 第21页 |
| 1.3 质粒和shRNA序列 | 第21页 |
| 1.4 引物序列 | 第21-23页 |
| 1.5 实验试剂 | 第23页 |
| 1.6 实验仪器 | 第23-24页 |
| 1.7 主要溶液配制 | 第24-26页 |
| 1.7.1 蛋白裂解液 | 第24页 |
| 1.7.2 Luciferase报告基因技术所用溶液 | 第24-25页 |
| 1.7.3 EMSA所用溶液 | 第25-26页 |
| 第二节 实验方法 | 第26-40页 |
| 2.1 质粒的小量抽提技术 | 第26页 |
| 2.2 质粒的大量抽提技术 | 第26-27页 |
| 2.3 磷酸钙转染 | 第27-28页 |
| 2.4 总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.5 反转录反应 | 第28-29页 |
| 2.6 RT-PCR | 第29页 |
| 2.7 实时荧光定量PCR(Q-PCR) | 第29-30页 |
| 2.8 Luciferase报告基因实验 | 第30-31页 |
| 2.9 基因组抽提实验 | 第31-32页 |
| 2.10 长片段PCR技术(Long Range PCR,LRPCR) | 第32页 |
| 2.11 免疫荧光(IF) | 第32-33页 |
| 2.12 蛋白质免疫印迹(Western Blot) | 第33-34页 |
| 2.13 染色体核型鉴定(karyotyping) | 第34-36页 |
| 2.14 凝胶迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA) | 第36-40页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第40-53页 |
| 第一节 NRF-1的表达分析 | 第40-41页 |
| 第二节 NRF-1与GASZ的关系阐明 | 第41-45页 |
| 2.1 NRF-1能够结合到GASZ核心启动子区域 | 第41-43页 |
| 2.2 NRF-1不能结合到甲基化的GASZ的启动子上 | 第43-45页 |
| 第三节. NRF-1对生殖细胞的影响 | 第45-47页 |
| 第四节 NRF-1条件敲除小鼠模型的构建 | 第47-53页 |
| 4.1 体内删除FRT位点NRF-1条件敲除小鼠模型的构建 | 第48-51页 |
| 4.2 体外删除FRT位点NRF-1条件敲除小鼠模型的构建 | 第51-53页 |
| 第四章 总结和讨论 | 第53-55页 |
| 附录Ⅰ | 第55-57页 |
| 附录Ⅱ | 第57-58页 |
| References | 第58-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
