| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 本文縮写符号 | 第13-15页 |
| 1. 前言 | 第15-23页 |
| 1.1 杆状病毒简介 | 第15-18页 |
| 1.1.1 杆状病毒的分类 | 第15-16页 |
| 1.1.2 杆状病毒的结构 | 第16页 |
| 1.1.3 杆状病毒基因表达的调控 | 第16-17页 |
| 1.1.4 杆状病毒的感染周期 | 第17-18页 |
| 1.2 杆状病毒的结构蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.1 多角体结构蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.2 核衣壳结构蛋白 | 第19页 |
| 1.2.3 包膜蛋白 | 第19页 |
| 1.3 λ-Red同源重组技术及其在杆状病毒基因功能研究中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 蛋白质相互作用研究-酵母双杂交技术 | 第20-21页 |
| 1.5 Bac-to-Bac系统 | 第21-22页 |
| 1.6 本实验研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 2. 材料和方法 | 第23-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-29页 |
| 2.1.1 病毒及质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株及细胞 | 第23页 |
| 2.1.3 培养基 | 第23-25页 |
| 2.1.4 抗生素 | 第25页 |
| 2.1.5 分子量标准和酶类 | 第25页 |
| 2.1.6 常用溶液及配制方法 | 第25-27页 |
| 2.1.7 常用化学试剂、耗材、试剂盒 | 第27-28页 |
| 2.1.8 主要仪器 | 第28页 |
| 2.1.9 引物合成和测序 | 第28页 |
| 2.1.10 本研究构建的重组质粒和病毒 | 第28-29页 |
| 2.2 基因克隆 | 第29-33页 |
| 2.2.1 pPRO-Ac132的构建 | 第29-33页 |
| 2.2.2 pET28-Ac132的构建 | 第33页 |
| 2.2.3 pGBKT7-Acl32的构建 | 第33页 |
| 2.3 Ac132原核表达和蛋白纯化 | 第33-36页 |
| 2.3.1 Ac132原核表达 | 第33-35页 |
| 2.3.2 蛋白质可溶性分析和纯化 | 第35-36页 |
| 2.4 Ac132多克隆抗体制备 | 第36页 |
| 2.5 蛋白印迹(Western blot) | 第36-37页 |
| 2.6 bacmid突变体的构建 | 第37-39页 |
| 2.6.1 Ac132敲除 | 第37页 |
| 2.6.2 Ac132敲除bacmid的鉴定 | 第37-38页 |
| 2.6.3 转座和重组bacmid的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.7 重组bacmid对Sf9细胞的转染 | 第39页 |
| 2.8 病毒上清的收取及滴度的测定 | 第39-40页 |
| 2.9 重组病毒对Sf9细胞的感染 | 第40页 |
| 2.10 BV的纯化 | 第40-41页 |
| 2.11 核衣壳蛋白与包膜蛋白分离和鉴定 | 第41页 |
| 2.12 透射电子显微镜分析 | 第41-42页 |
| 2.13 酵母双杂交实验 | 第42-49页 |
| 2.13.1 诱饵质粒的构建 | 第42页 |
| 2.13.2 诱饵质粒转化至AH109,Y187菌株 | 第42-43页 |
| 2.13.3 诱饵质粒筛选cDNA文库 | 第43-44页 |
| 2.13.4 划线筛选阳性克隆 | 第44页 |
| 2.13.5 X-gal显色 | 第44页 |
| 2.13.6 酵母菌落PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 2.13.7 酵母质粒提取及PCR鉴定 | 第45-47页 |
| 2.13.8 酵母质粒转化DH5a菌株 | 第47页 |
| 2.13.9 大肠杆菌质粒提取及RCR鉴定 | 第47页 |
| 2.13.10 回交验证相互作用 | 第47-48页 |
| 2.13.11 测序及序列分析 | 第48-49页 |
| 3. 研究结果 | 第49-68页 |
| 3.1 Ac132的原核表达及抗血清的制备 | 第49-51页 |
| 3.2 Ac132在被感染的Sf9细胞中的表达时相分析 | 第51-52页 |
| 3.3 Ac132在BV中的定位 | 第52页 |
| 3.4 Ac132敲除和回复突变体的构建 | 第52-56页 |
| 3.5 Ac132敲除对病毒增殖的影响 | 第56-59页 |
| 3.6 Ac132敲除突变体和敲除回复突变体转染Sf9细胞的电镜分析 | 第59-60页 |
| 3.7 与Ac132相互作用的Sf9细胞蛋白基因筛查 | 第60-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 在校期间撰写的论文 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
