| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 一、引言 | 第10-21页 |
| 1 植物抗病毒基因工程 | 第10-14页 |
| 1.1 非病毒来源基因介导的抗性 | 第10-11页 |
| 1.2 病毒来源基因介导的抗性 | 第11-14页 |
| 2 RNAi的作用机制 | 第14-15页 |
| 3 利用原核表达dsRNA抗病毒的研究进展 | 第15-16页 |
| 4 番木瓜及番木瓜环斑病毒简介 | 第16-19页 |
| 4.1 番木瓜简介 | 第16-17页 |
| 4.2 番木瓜环斑病毒概述 | 第17-19页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| 二、材料与方法 | 第21-41页 |
| 1 材料 | 第21-24页 |
| 1.1 植物材料 | 第21页 |
| 1.2 质粒与菌株 | 第21页 |
| 1.3 载体及图谱 | 第21-22页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 1.5 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-41页 |
| 2.1 dsRNA原核表达载体的构建 | 第24-30页 |
| 2.2 dsRNA原核表达体系的构建 | 第30-31页 |
| 2.3 dsRNA的诱导表达 | 第31-32页 |
| 2.4 CP-GFP瞬时植物表达载体的构建 | 第32-34页 |
| 2.5 利用番木瓜叶片原生质体瞬时表达体系检测dsRNA的沉默效果 | 第34-38页 |
| 2.6 dsRNA介导的病毒抗性鉴定 | 第38-41页 |
| 三、结果与分析 | 第41-54页 |
| 1 dsRNA原核表达载体的构建 | 第41-44页 |
| 1.1 PRSV-CP基因的克隆 | 第41页 |
| 1.2 ihpRNA植物表达载体的酶切鉴定 | 第41-43页 |
| 1.3 dsRNA原核表达载体的鉴定 | 第43-44页 |
| 2 dsRNA原核表达体系的构建 | 第44-45页 |
| 3 dsRNA的诱导表达 | 第45-46页 |
| 4 CP-GFP瞬时植物表达载体的构建 | 第46-47页 |
| 5 利用番木瓜叶片原生质瞬时表达体系对dsRNA沉默效果的初步分析 | 第47-50页 |
| 5.1 番木瓜叶片原生质体的分离 | 第47-48页 |
| 5.2 CP-dsRNA沉默效果的定性观察 | 第48-49页 |
| 5.3 RT-PCR对CP-GFP mRNA表达量分析 | 第49-50页 |
| 6 不同片段大小的dsRNA介导的抗病性鉴定 | 第50-54页 |
| 6.1 番木瓜植株接种PRSV 30天后的发病情况 | 第50-52页 |
| 6.2 番木瓜叶片总RNA提取结果 | 第52页 |
| 6.3 Real-time RT-PCR结果 | 第52-54页 |
| 四、讨论 | 第54-57页 |
| 1 原核表达dsRNA的最佳缺陷性菌株的选择 | 第54页 |
| 2 最佳原核表达载体的确定 | 第54-55页 |
| 3 原核表达的dsRNA介导的RNA沉默 | 第55-57页 |
| 五、结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
