摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-7页 |
缩略词表 | 第8-12页 |
第1章 前言 | 第12-22页 |
1.1 高等植物花期调控分子机理研究进展 | 第12-19页 |
1.1.1 自主途径 (autonomous pathway) | 第12-13页 |
1.1.2 年龄途径 (aging pathway) | 第13-14页 |
1.1.3 光周期途径 (photoperiod pathway) | 第14-15页 |
1.1.4 温度对开花的调控 | 第15-17页 |
1.1.4.1 春化途径 (vernalization pathway) | 第15页 |
1.1.4.2 热感应途径 (thermosensory pathway或ambient temperature pathway) | 第15-17页 |
1.1.5 赤霉素途径 (gibberellin pathway) | 第17页 |
1.1.6 干旱对植物开花的影响 | 第17-18页 |
1.1.7 开花调控在一些作物中的研究进展 | 第18-19页 |
1.2 枇杷花期调控的研究现状及本研究的目的与意义 | 第19-21页 |
1.3 本研究的技术路线 | 第21-22页 |
第2章 枇杷花期调控相关基因的克隆,功能验证及表达分析 | 第22-63页 |
2.1 引言 | 第22页 |
2.2 材料与方法 | 第22-29页 |
2.2.1 材料 | 第22页 |
2.2.2 枇杷样品采集 | 第22-23页 |
2.2.2.1 不同时期样品 | 第22-23页 |
2.2.2.2 组织样品 | 第23页 |
2.2.2.3 昼夜节律样品 | 第23页 |
2.2.3 枇杷顶芽顶端分生组织的形态解剖学观察 | 第23-24页 |
2.2.4 总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第24页 |
2.2.5 基因克隆 | 第24页 |
2.2.6 实时荧光定量PCR (qPCR) 分析 | 第24-26页 |
2.2.7 载体构建 | 第26-27页 |
2.2.8 拟南芥转基因实验 | 第27-28页 |
2.2.8.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
2.2.8.2 农杆菌感受态细胞的转化 | 第27页 |
2.2.8.3 转化拟南芥 | 第27-28页 |
2.2.9 烟草瞬时转化实验 | 第28-29页 |
2.3 结果与分析 | 第29-60页 |
2.3.1 台湾枇杷恒春变型顶芽的成花观察 | 第29-30页 |
2.3.2 枇杷花期调控相关基因的克隆 | 第30-40页 |
2.3.2.1 FT的克隆 | 第30-32页 |
2.3.2.2 bZIP转录因子基因FD的克隆 | 第32-33页 |
2.3.2.3 光周期途径基因CO的克隆 | 第33-35页 |
2.3.2.4 光周期途径基因GI的克隆 | 第35-36页 |
2.3.2.5 MADS-Box转录因子基因SOC1和SVP的克隆 | 第36-38页 |
2.3.2.6 bZIP转录因子基因PIF4的克隆 | 第38-40页 |
2.3.3 花期调控相关基因在台湾枇杷恒春变型中的时空表达分析 | 第40-45页 |
2.3.3.1 在台湾枇杷恒春变型不同组织中的表达分析 | 第40-41页 |
2.3.3.2 在台湾枇杷恒春变型不同时期叶片中的表达分析 | 第41-44页 |
2.3.3.3 在台湾枇杷恒春变型不同时期顶芽中的表达分析 | 第44-45页 |
2.3.4 光周期基因EdGI,EdCO和EdFT的昼夜节律表达分析 | 第45页 |
2.3.5 枇杷花期调控相关基因编码蛋白的亚细胞定位 | 第45-48页 |
2.3.6 枇杷花期调控相关基因的遗传功能验证 | 第48-54页 |
2.3.6.1 EdFT显著加速拟南芥开花 | 第48-49页 |
2.3.6.2 EdFDs加速拟南芥开花 | 第49-50页 |
2.3.6.3 光周期途径基因EdCO和EdGI加速拟南芥开花 | 第50-52页 |
2.3.6.4 EdSOC1加速拟南芥开花 | 第52-54页 |
2.3.6.5 EdPIF4过表达不影响野生型拟南芥开花时间 | 第54页 |
2.3.7 EdFT与EdFDs的相互作用 | 第54-55页 |
2.3.8 普通枇杷不同开花时间品种花期调控的初步研究 | 第55-60页 |
2.4 讨论 | 第60-63页 |
第3章 不同花期枇杷的转录组测序与生物信息学分析 | 第63-82页 |
3.1 引言 | 第63页 |
3.2 材料与方法 | 第63-65页 |
3.2.1 材料 | 第63页 |
3.2.2 测序样品时期的确定 | 第63页 |
3.2.3 RNA提取,文库构建及测序 | 第63页 |
3.2.4 转录组数据组装及功能注释 | 第63-64页 |
3.2.5 预测编码蛋白框(CDS) | 第64页 |
3.2.6 转录组unigene的差异表达基因 (DEG) 分析 | 第64页 |
3.2.7 基因共表达网络构建 | 第64页 |
3.2.8 花期相关基因的鉴定 | 第64-65页 |
3.2.9 差异表达基因的定量验证 | 第65页 |
3.3 结果与分析 | 第65-79页 |
3.3.1 测序样品所选时期的茎顶端状态观察 | 第65-66页 |
3.3.2 转录组测序及组装结果与分析 | 第66-68页 |
3.3.3 Unigene功能注释结果与分析 | 第68-71页 |
3.3.3.1 Unigene序列同源性分析 | 第68-69页 |
3.3.3.2 COG功能分类 | 第69-70页 |
3.3.3.3 GO分类 | 第70-71页 |
3.3.4 CDS预测结果 | 第71-72页 |
3.3.5 差异表达基因分析 | 第72页 |
3.3.6 基因共表达网络分析 | 第72-76页 |
3.3.7 花期调控相关同源基因的鉴定及表达分析 | 第76-78页 |
3.3.8 差异表达基因的RNA-Seq表达量和qPCR验证分析 | 第78-79页 |
3.4 讨论 | 第79-82页 |
第4章 论文结论、创新点及进一步研究设想 | 第82-85页 |
4.1 结论 | 第82-83页 |
4.2 本论文创新之处 | 第83页 |
4.3 进一步研究设想 | 第83-85页 |
致谢 | 第85-87页 |
参考文献 | 第87-98页 |
附录A 枇杷花期调控相关基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列 | 第98-105页 |
附录B 转录组数据中鉴定的花期调控相关基因 | 第105-109页 |
附录C 攻读博士学位期间论文发表情况 | 第109页 |