| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩写词及英文对照 | 第6-10页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 根结线虫及其危害 | 第10页 |
| 1.2 根结线虫的生活史 | 第10-12页 |
| 1.3 根结线虫的防治 | 第12页 |
| 1.4 植物寄生线虫效应子蛋白的研究概况 | 第12-15页 |
| 1.4.1 植物寄生线虫的效应子蛋白 | 第12-13页 |
| 1.4.2 降解或修饰细胞壁 | 第13页 |
| 1.4.3 参与调控寄主细胞代谢和信号途径 | 第13-14页 |
| 1.4.4 抑制寄主的防卫反应 | 第14-15页 |
| 1.4.5 半胱氨酸蛋白酶抑制剂蛋白的研究概况 | 第15页 |
| 1.5 植物寄生线虫效应蛋白功能的研究方法 | 第15-19页 |
| 1.5.1 常用研究方法概述 | 第15页 |
| 1.5.2 RNAi在植物寄生线虫研究中的应用 | 第15-17页 |
| 1.5.3 原位杂交技术和龄期表达 | 第17-18页 |
| 1.5.4 瞬时表达 | 第18页 |
| 1.5.5 酵母双杂交 | 第18-19页 |
| 1.6 研究目的及内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-41页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 供试线虫种群和植物 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第20页 |
| 2.1.4 主要溶液配方 | 第20-21页 |
| 2.1.5 主要培养基配方 | 第21页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-41页 |
| 2.2.1 象耳豆根结线虫总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.2 象耳豆根结线虫基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.3 象耳豆根结线虫MeCPI基因cDNA的获得 | 第23页 |
| 2.2.4 象耳豆根结线虫Me-CPI基因EST序列的获得 | 第23-28页 |
| 2.2.5 MeCPI基因在象耳豆根结线虫不同发育阶段的表达量分析 | 第28-31页 |
| 2.2.6 MeCPI基因的体外RNAi | 第31-33页 |
| 2.2.7 MeCPI基因的原位杂交 | 第33-35页 |
| 2.2.8 瞬时表达 | 第35-41页 |
| 3 结果 | 第41-51页 |
| 3.1 MeCPI基因的克隆及序列分析 | 第41-45页 |
| 3.2 原位杂交 | 第45-46页 |
| 3.2.1 杂交探针的合成 | 第45页 |
| 3.2.2 原位杂交结果 | 第45-46页 |
| 3.3 MeCPI基因在象耳豆根结线虫不同发育阶段表达量的分析 | 第46-47页 |
| 3.4 体外浸泡RNAi | 第47-49页 |
| 3.4.1 MeCPI基因dsRNA的合成 | 第47-48页 |
| 3.4.2 qRT-PCR对MeCPI沉默效果的检测 | 第48-49页 |
| 3.4.3 体外RNAi对象耳豆根结线虫侵染力的影响 | 第49页 |
| 3.5 MeCPI基因的烟草瞬时表达 | 第49-51页 |
| 3.5.1 植物表达载体的构建 | 第49页 |
| 3.5.2 工程农杆菌的PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 3.5.3 Western-blot检测 | 第50-51页 |
| 4 结论与讨论 | 第51-55页 |
| 4.1 结论 | 第51页 |
| 4.2 讨论 | 第51-55页 |
| 4.2.1 MeCPI基因的克隆 | 第51-52页 |
| 4.2.2 MeCPI基因的定位与龄期表达 | 第52页 |
| 4.2.3 MeCPI基因的体外RNAi | 第52-53页 |
| 4.2.4 MeCPI基因的瞬时表达 | 第53-54页 |
| 4.2.5 本研究需进一步解决的问题 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
