| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩写词与英汉对照 | 第7-13页 |
| 1 前言 | 第13-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-48页 |
| 2.1 材料 | 第17-27页 |
| 2.1.1 样品 | 第17页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第17页 |
| 2.1.3 菌种 | 第17页 |
| 2.1.4 载体 | 第17页 |
| 2.1.5 酶和试剂 | 第17-19页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.7 常用溶液的配制 | 第20-26页 |
| 2.1.8 引物 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-48页 |
| 2.2.1 贾第素 α-13 的原核表达及亚细胞定位 | 第27-43页 |
| 2.2.1.1 贾第虫滋养体的培养及冻存 | 第27-28页 |
| 2.2.1.2 贾第虫基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.1.3 贾第虫贾第素 α-13 基因的扩增 | 第29页 |
| 2.2.1.4 PCR产物检测 | 第29-30页 |
| 2.2.1.5 PCR扩增产物的回收与纯化 | 第30页 |
| 2.2.1.6 p MD-18T-α-13 克隆载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.1.7 克隆载体的转化 | 第31页 |
| 2.2.1.8 p MD18-α-13 克隆载体的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.1.9 贾第素 α-13 的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 2.2.1.10 带粘性末端目的基因片段的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.1.11 表达载体p ET-28a(+)的线性化 | 第34页 |
| 2.2.1.12 重组表达载体p ET-28a( + )-g-α13 的连接 | 第34-35页 |
| 2.2.1.13 重组表达载体的转化 | 第35页 |
| 2.2.1.14 重组质粒的双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.1.15 重组质粒的诱导表达 | 第36-37页 |
| 2.2.1.16 贾第素 α-13 融合蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 2.2.1.17 融合蛋白表达部位的检测 | 第38页 |
| 2.2.1.18 融合蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 2.2.1.19 重组蛋白Western blot检测 | 第39页 |
| 2.2.1.20 融合蛋白的蛋白浓度测定 | 第39-40页 |
| 2.2.1.21 实验动物免疫 | 第40-41页 |
| 2.2.1.22 血清分离 | 第41页 |
| 2.2.1.23 间接ELISA法检测抗血清效价 | 第41页 |
| 2.2.1.24 贾第虫滋养体虫体蛋白的提取 | 第41-42页 |
| 2.2.1.25 Western blot检测抗血清的结合力和特异性 | 第42页 |
| 2.2.1.26 贾第素 α-13 的免疫荧光显微镜观察 | 第42-43页 |
| 2.2.2 贾第虫EF-1α 蛋白的原核表达及亚细胞定位 | 第43-48页 |
| 2.2.2.1 贾第虫虫株的培养及冻存 | 第43页 |
| 2.2.2.2 贾第虫基因组DNA的提取 | 第43页 |
| 2.2.2.3 贾第虫EF-1α 基因的扩增 | 第43-44页 |
| 2.2.2.4 PCR产物检测 | 第44页 |
| 2.2.2.5 PCR扩增产物的回收与纯化 | 第44页 |
| 2.2.2.6 p MD-18T-EF-1α 克隆载体的构建 | 第44页 |
| 2.2.2.7 克隆载体的转化 | 第44页 |
| 2.2.2.8 p MD18-EF-1α 克隆载体的提取 | 第44页 |
| 2.2.2.9 贾第素EF-1α 的生物信息学分析 | 第44页 |
| 2.2.2.10 带粘性末端目的基因片段的制备 | 第44页 |
| 2.2.2.11 表达载体p ET-28a(+)的线性化 | 第44页 |
| 2.2.2.12 重组表达载体p ET-28a( + )-EF-1α 的连接 | 第44页 |
| 2.2.2.13 重组表达载体的转化 | 第44页 |
| 2.2.2.14 重组质粒的双酶切鉴定 | 第44页 |
| 2.2.2.15 重组质粒的诱导表达 | 第44-45页 |
| 2.2.2.16 延伸因子EF-1α 融合蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳 | 第45页 |
| 2.2.2.17 融合蛋白表达部位的检测 | 第45页 |
| 2.2.2.18 融合蛋白的纯化 | 第45页 |
| 2.2.2.19 重组蛋白Western blot检测 | 第45-46页 |
| 2.2.2.20 融合蛋白的蛋白浓度测定 | 第46页 |
| 2.2.2.21 延伸因子EF-1α 抗原肽的合成及偶联 | 第46页 |
| 2.2.2.22 实验动物免疫 | 第46-47页 |
| 2.2.2.23 血清分离 | 第47页 |
| 2.2.2.24 多克隆抗体的纯化 | 第47页 |
| 2.2.2.25 间接ELISA法检测抗血清效价 | 第47-48页 |
| 2.2.2.26 Western blot检测抗血清的结合力和特异性 | 第48页 |
| 2.2.2.27 滋养体EF-1α 的免疫荧光显微镜观察 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-64页 |
| 3.1 贾第素 α-13 的原核表达及亚细胞定位 | 第48-56页 |
| 3.1.1 贾第素 α-13 基因的扩增与p MD18-T-α-13 克隆载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.1.2 重组质粒双酶切鉴定 | 第49页 |
| 3.1.3 贾第素 α-13 的生物信息学分析 | 第49-51页 |
| 3.1.3.1 贾第素 α-13 的信号肽预测 | 第49页 |
| 3.1.3.2 贾第素 α-13 的跨膜区分析 | 第49页 |
| 3.1.3.3 贾第素 α-13 的蛋白疏水性分析 | 第49-50页 |
| 3.1.3.4 贾第素 α-13 的磷酸化位点分析 | 第50页 |
| 3.1.3.5 贾第素 α-13 的二级结构预测 | 第50页 |
| 3.1.3.6 贾第素 α-13 的三级结构预测 | 第50-51页 |
| 3.1.4 贾第素 α-13 融合蛋白表达条件的优化 | 第51-53页 |
| 3.1.4.1 常规IPTG的诱导表达及条件优化 | 第51-52页 |
| 3.1.4.2 复合自动诱导培养基ZYM-5052 的诱导表达 | 第52-53页 |
| 3.1.5 重组蛋白表达部位的鉴定 | 第53页 |
| 3.1.6 贾第素 α-13 融合蛋白的分离与纯化 | 第53-54页 |
| 3.1.7 抗血清效价测定 | 第54页 |
| 3.1.8 贾第素 α-13 抗血清的结合力和特异性验证 | 第54-55页 |
| 3.1.9 贾第虫滋养体 α-13 的免疫荧光定位 | 第55-56页 |
| 3.2 延伸因子EF-1α 的原核表达及亚细胞定位 | 第56-64页 |
| 3.2.1 贾第素 α-13 基因的扩增与p MD18-T-EF-1α 克隆载体的构建 | 第56页 |
| 3.2.2 重组质粒的双酶切鉴定 | 第56-57页 |
| 3.2.3 延伸因子EF-1α 的生物信息学分析 | 第57-59页 |
| 3.2.3.1 延伸因子EF-1α 跨膜区分析 | 第57页 |
| 3.2.3.2 延伸因子EF-1α 蛋白疏水性分析 | 第57页 |
| 3.2.3.3 延伸因子EF-1α 的磷酸化位点分析 | 第57页 |
| 3.2.3.4 贾第虫延伸因子EF-1α 蛋白二级结构预测 | 第57页 |
| 3.2.3.5 贾第虫延伸因子EF-1α 蛋白三级结构预测 | 第57-58页 |
| 3.2.3.6 贾第虫延伸因子EF-1α 的抗原表位分析 | 第58-59页 |
| 3.2.4 贾第虫EF-1α 蛋白的诱导表达与鉴定 | 第59-61页 |
| 3.2.5 贾第虫EF-1α 融合蛋白的纯化及浓度测定 | 第61页 |
| 3.2.6 贾第虫EF-1α 蛋白特异性抗血清效价测定 | 第61页 |
| 3.2.7 贾第虫EF-1α 蛋白特异性抗血清的SDS-PAGE分析 | 第61-62页 |
| 3.2.8 EF-1α 抗血清的结合力和特异性验证 | 第62-63页 |
| 3.2.9 贾第虫滋养体EF-1α 的免疫荧光定位 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-69页 |
| 4.1 贾第素 α-13 的原核表达及亚细胞定位 | 第64-66页 |
| 4.2 延伸因子EF-1α 的原核表达及亚细胞定位 | 第66-69页 |
| 全文总结 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 附录A 贾第素α-13 及延伸因子EF-1α 扩增序列 | 第76-77页 |
| 附录B pMD18-T载体 | 第77-78页 |
| 附录C pET-28a(+)载体 | 第78-79页 |
| 附录D 攻读硕士学位期间论文发表、学术会议及获奖情况 | 第79-80页 |
