首页--工业技术论文--化学工业论文--其他化学工业论文--发酵工业论文--其他发酵工业论文

改造枯草芽孢杆菌代谢通路制备透明质酸

中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
第一章 前言第13-24页
    1.1 引言第13页
    1.2 HA结构特征及理化性质第13-15页
        1.2.1 HA结构及物理性质第13-14页
        1.2.2 HA化学性质第14-15页
    1.3 HA应用第15-16页
    1.4 HA市场调查及前景发展第16-17页
    1.5 HA生产第17-18页
        1.5.1 自然界中HA在各物种分布情况第17页
        1.5.2 动物组织提取法生产HA第17页
        1.5.3 微生物发酵法生产HA第17-18页
    1.6 HA合成途径第18-19页
        1.6.1 HAS分类及特点第18-19页
        1.6.2 链球菌属分类及其特点第19页
    1.7 枯草芽孢杆菌介绍及特点第19-21页
        1.7.1 芽孢杆菌及枯草芽孢杆菌第19-20页
        1.7.2 枯草芽孢杆菌基因工程和表达系统第20-21页
    1.8 合成生物学第21-22页
    1.9 立题意义及研究内容第22-24页
        1.9.1 立题意义第22页
        1.9.2 研究内容第22-24页
第二章 HAS基因克隆及HA合成通路构建第24-47页
    2.1 引言第24页
    2.2 实验材料第24-28页
        2.2.1 菌种和质粒第24页
        2.2.2 培养基及配制溶液第24-26页
        2.2.3 主要实验试剂第26-27页
        2.2.4 实验仪器第27-28页
    2.3 大肠杆菌重组质粒PUC-HAS构建第28-35页
        2.3.1 HAS模板基因选择第28页
        2.3.2 引物设计及质粒选择第28-29页
        2.3.3 酿脓链球菌活化及培养第29-30页
        2.3.4 酿脓链球菌基因组DNA提取第30-31页
        2.3.5 目的基因HAS的PCR扩增第31-32页
        2.3.6 PCR产物胶回收第32-33页
        2.3.7 限制性内切酶消化第33页
        2.3.8 目的片段与载体的连接第33-34页
        2.3.9 大肠杆菌感受态的制作第34页
        2.3.10 重组质粒转化DH5α第34页
        2.3.11 菌落PCR检测阳性克隆第34-35页
    2.4 枯草芽孢杆菌重组质粒的构建第35-39页
        2.4.1 枯草芽孢杆菌感受态制备第35页
        2.4.2 以PUC-HAS重组质粒为模板二次获得HAS基因序列第35-36页
        2.4.3 目的基因片段与质粒双酶切第36页
        2.4.4 连接及转化第36页
        2.4.5 枯草芽孢杆菌菌落PCR筛选阳性克隆第36页
        2.4.6 pNCMO2-HAS质粒提取第36-37页
        2.4.7 pNMCO2-HAS重组质粒双酶切验证第37-38页
        2.4.8 SDS-PAGE检测HAS表达量第38-39页
    2.5 实验结果第39-45页
        2.5.1 酿脓链球菌基因组DNA提取第39-40页
        2.5.2 温度梯度PCR扩增HAS基因片段第40-41页
        2.5.3 pUC119质粒及HAS基因片段双酶切电泳检测第41页
        2.5.4 含pUC-HAS重组质粒大肠杆菌菌落PCR产物电泳检测第41-42页
        2.5.5 对pUC-HAS重组质粒测序及比对第42-43页
        2.5.6 pNCM02-HAS重组质粒转化枯草芽孢杆菌菌落PCR检测第43页
        2.5.7 pNCM02-HAS重组质粒转化枯草芽孢杆菌双酶切检测第43-44页
        2.5.8 对pNCM02-HAS重组质粒测序及比对第44页
        2.5.9 SDS-PAGE蛋白电泳检测HAS表达第44-45页
    2.6 本章小结第45-47页
第三章 新代谢通路合成HA产量测定第47-58页
    3.1 引言第47页
    3.2 材料与方法第47-48页
        3.2.1 实验试剂第47页
        3.2.2 实验仪器第47-48页
    3.3 实验方法第48页
    3.4 CTAB法检测发酵液中HA优化第48-51页
        3.4.1 HA与CTAB反应溶液的光谱学特性第48-49页
        3.4.2 基于不同波长对HA-CTAB反应溶液制作标准曲线的影响第49页
        3.4.3 基于不同CTAB浓度对反应体系稳定性影响第49页
        3.4.4 基于不同温度对反应体系稳定性影响第49-50页
        3.4.5 基于不同反应时间对反应体系稳定性影响第50页
        3.4.6 基于不同杂质对CTAB-HA测定结果的影响第50-51页
    3.5 反应条件优化小结第51-53页
    3.6 培养液中HA按量测定及HA性质初测第53-55页
        3.6.1 培养液中HA含量测定第53页
        3.6.2 HA性质初测第53-55页
    3.7 HA分离纯化第55-56页
        3.7.1 背景介绍:第55页
        3.7.2 操作方法第55页
        3.7.3 HA得率及蛋白除去率第55-56页
    3.8 本章小结第56-58页
第四章 HA发酵条件优化第58-67页
    4.1 引言第58页
    4.2 单因素检测不同因素对枯草芽孢杆菌发酵的影响第58-59页
        4.2.1 碳源种类对枯草芽孢杆菌发酵的影响第58页
        4.2.2 氮源种类对枯草芽孢杆菌发酵的影响第58页
        4.2.3 金属离子种类对枯草芽孢杆菌发酵的影响第58-59页
        4.2.4 培养基PH对枯草芽孢杆菌发酵的影响第59页
        4.2.5 培养温度对枯草芽孢杆菌发酵的影响第59页
        4.2.6 发酵时间对枯草芽孢杆菌发酵的影响第59页
    4.3 单因素分析实验小结第59-63页
        4.3.1 不同碳源对重组枯草芽孢杆菌发酵生产HA的影响第59-60页
        4.3.2 不同氮源对重组枯草芽孢杆菌发酵生产HA的影响第60-61页
        4.3.3 金属离子对重组枯草芽孢杆菌发酵生产HA的影响第61页
        4.3.4 发酵温度对重组枯草芽孢杆菌发酵生产HA的影响第61-62页
        4.3.5 培养基pH对重组枯草芽孢杆菌发酵生产HA的影响第62-63页
        4.3.6 发酵时间对重组枯草芽孢杆菌发酵生产HA的影响第63页
    4.4 正交设计优化培养基组分第63-65页
    4.5 发酵罐小试第65页
    4.6 本章小结第65-67页
第五章 结论第67-68页
参考文献第68-73页
致谢第73页

论文共73页,点击 下载论文
上一篇:慢病毒介导的SCL基因体外转染ICC效果研究
下一篇:M公司自动化项目方案选择及投资收益分析