| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-20页 |
| 1.1 杨树叶锈病研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 杨树抗锈病基因MXC3 研究进展 | 第14页 |
| 1.3 RNA干扰（RNAi）研究进展 | 第14-17页 |
| 1.3.1 RNAi的发现 | 第14-15页 |
| 1.3.2 RNAi的机制和原理 | 第15-16页 |
| 1.3.3 RNAi在植物学的应用 | 第16-17页 |
| 1.4 农杆菌介导杨树遗传转化研究进展 | 第17-20页 |
| 1.4.1 抗病害转基因杨树研究 | 第17-18页 |
| 1.4.2 其他转基因杨树研究 | 第18页 |
| 1.4.3 影响农杆菌介导杨树转化的主要因素 | 第18-20页 |
| 1.4.3.1 不同类型菌株的致病力 | 第19页 |
| 1.4.3.2 不同杨树无性系间的差异 | 第19页 |
| 1.4.3.3 抗生素的选择 | 第19-20页 |
| 1.4.3.4 菌液浓度和侵染时间 | 第20页 |
| 1.4.3.5 Vir基因的活化 | 第20页 |
| 2 前言 | 第20-23页 |
| 2.1 研究背景 | 第20-22页 |
| 2.2 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 2.3 技术路线 | 第23页 |
| 3 材料与方法 | 第23-40页 |
| 3.1 试验材料 | 第23-25页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 3.1.2 质粒和菌株 | 第23-24页 |
| 3.1.3 抗生素 | 第24页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第24页 |
| 3.1.5 培养基 | 第24-25页 |
| 3.1.5.1 细菌培养基 | 第24页 |
| 3.1.5.2 植物培养基 | 第24-25页 |
| 3.2 试验方法 | 第25-40页 |
| 3.2.1 RNAi目标片段选取与合成 | 第25页 |
| 3.2.1.1 RNAi目标片段的选取 | 第25页 |
| 3.2.1.2 RNAi目标片段的合成 | 第25页 |
| 3.2.2 Gateway克隆 | 第25-31页 |
| 3.2.2.1 目标序列PCR扩增产物回收 | 第25-26页 |
| 3.2.2.2 BP反应 | 第26-28页 |
| 3.2.2.3 LR反应 | 第28-30页 |
| 3.2.2.4 转化农杆菌 | 第30-31页 |
| 3.2.3 农杆菌介导法转化南林895杨 | 第31-33页 |
| 3.2.3.1 南林895无菌体系的建立 | 第31-32页 |
| 3.2.3.2 叶片分化的卡那霉素浓度确定 | 第32-33页 |
| 3.2.3.3 菌株的活化 | 第33页 |
| 3.2.3.4 菌液的制备 | 第33页 |
| 3.2.4 影响农杆菌介导效果的因素 | 第33-35页 |
| 3.2.4.1 菌液浓度和侵染时间 | 第33-34页 |
| 3.2.4.2 选择方式 | 第34页 |
| 3.2.4.3 其他因素 | 第34-35页 |
| 3.2.5 895 杨Kan抗性植株的检测 | 第35-40页 |
| 3.2.5.1 CTAB法提取植物总DNA | 第35-36页 |
| 3.2.5.2 抗性植株的PCR检测 | 第36-37页 |
| 3.2.5.3 半定量RT-PCR检测 | 第37-40页 |
| 3.2.5.4 转基因植株的移栽 | 第40页 |
| 4 结果与分析 | 第40-55页 |
| 4.1 杨树MXC3 基因（Pt.MXC3）及蛋白结构分析 | 第40-41页 |
| 4.2 Pt.MXC3.RNAi目标序列选择 | 第41-42页 |
| 4.3 Pt.MXC3.RNAi目标序列合成与验证 | 第42-44页 |
| 4.4 Gateway克隆 | 第44-47页 |
| 4.4.1 BP反应 | 第44-45页 |
| 4.4.2 LR反应 | 第45-46页 |
| 4.4.3 转化农杆菌 | 第46-47页 |
| 4.5 不同初代培养基对895杨茎段萌芽的影响 | 第47-48页 |
| 4.6 卡那霉素（kan）对895杨叶片再生不定芽的影响 | 第48-49页 |
| 4.7 影响农杆菌介导效果的因素 | 第49-52页 |
| 4.7.1 菌液浓度与侵染时间对转化率的影响 | 第49-51页 |
| 4.7.2 选择方式对转化率的影响 | 第51-52页 |
| 4.8 卡那抗性植株的阳性检测 | 第52-53页 |
| 4.9 半定量RT-PCR检测 | 第53-55页 |
| 4.9.1 cDNA质量检测 | 第53-54页 |
| 4.9.2 表达量检测 | 第54-55页 |
| 5 讨论 | 第55-61页 |
| 5.1 Gateway技术构建Pt.MXC3.RNAi载体 | 第55-56页 |
| 5.2 Kan临界浓度的筛选 | 第56-57页 |
| 5.3 影响农杆菌介导的因素 | 第57-59页 |
| 5.3.1 预培养时间 | 第57-58页 |
| 5.3.2 共培养时间 | 第58页 |
| 5.3.3 乙酰丁香酮对转化效率的影响 | 第58-59页 |
| 5.3.4 菌液浓度和侵染时间 | 第59页 |
| 5.3.5 选择方式 | 第59页 |
| 5.4 假阳性苗的问题 | 第59-60页 |
| 5.5 抗性植株的检测 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
