| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1 类黄酮化合物 | 第11-12页 |
| 2 MYB转录因子概述 | 第12页 |
| 3 类黄酮生物合成相关基因 | 第12-17页 |
| 3.1 CPC基因简介 | 第13-14页 |
| 3.2 类黄酮生物合成结构基因 | 第14-17页 |
| 3.2.1 花青素生物合成相关酶基因 | 第14-17页 |
| 3.2.2 黄酮醇生物合成相关酶基因 | 第17页 |
| 3.2.3 原花青素生物合成相关酶基因 | 第17页 |
| 4 酵母双杂交系统 | 第17-19页 |
| 4.1 酵母双杂交的原理 | 第17-18页 |
| 4.2 酵母双杂交的应用 | 第18-19页 |
| 5 RNA干扰研究进展 | 第19-20页 |
| 6 研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 7 研究技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 酵母双杂交筛选与CPC蛋白互作蛋白 | 第22-35页 |
| 1 引言 | 第22页 |
| 2 材料 | 第22-24页 |
| 2.1 菌株与载体 | 第22页 |
| 2.2 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.3 培养基 | 第23-24页 |
| 3 实验方法 | 第24-29页 |
| 3.1 AtCPC基因酵母双杂交诱饵载体的构建 | 第24-28页 |
| 3.1.1 引物设计及AtCPC基因的克隆 | 第24页 |
| 3.1.2 片段回收及连接克隆载体 | 第24-25页 |
| 3.1.3 克隆载体转化大肠杆菌并筛选阳性克隆 | 第25页 |
| 3.1.4 质粒提取 | 第25页 |
| 3.1.5 质粒双酶切及目的条带的回收 | 第25-26页 |
| 3.1.6 诱饵载体连接及热激转化大肠杆菌 | 第26页 |
| 3.1.7 阳性克隆的筛选及质粒双酶切检测 | 第26页 |
| 3.1.8 重组质粒转化酵母Y187 | 第26-27页 |
| 3.1.9 自激活检测 | 第27-28页 |
| 3.2 酵母双杂交筛选与CPC蛋白互作蛋白 | 第28-29页 |
| 3.2.1 文库酵母AH109 与诱饵酵母Y187 杂交 | 第28页 |
| 3.2.2 菌株的收集与初步筛选 | 第28页 |
| 3.2.3 测序结果分析 | 第28-29页 |
| 3.2.4 X-α-gal显色反应 | 第29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-33页 |
| 4.1 AtCPC基因的克隆 | 第29页 |
| 4.2 重组质粒双酶切验证 | 第29-30页 |
| 4.3 重组质粒转化酵母Y187 | 第30-31页 |
| 4.4 自激活检测 | 第31页 |
| 4.5 酵母双杂交筛选与CPC蛋白互作蛋白 | 第31-33页 |
| 4.5.1 菌落PCR初步筛选 | 第31-32页 |
| 4.5.2 测序结果分析 | 第32页 |
| 4.5.3 X-α-gal显色反应 | 第32-33页 |
| 5 讨论 | 第33-35页 |
| 5.1 AtCPC基因酵母双杂交诱饵载体的构建 | 第33页 |
| 5.2 酵母双杂交筛选与CPC蛋白互作蛋白 | 第33-35页 |
| 第三章 类黄酮生物合成相关基因的载体构建 | 第35-48页 |
| 1 引言 | 第35页 |
| 2 材料 | 第35-36页 |
| 3 实验方法 | 第36-40页 |
| 3.1 类黄酮生物合成相关基因超量表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.1.1 玫瑰花蕾总RNA的提取、纯化及反转录 | 第36页 |
| 3.1.2 引物设计及类黄酮生物合成相关结构基因克隆 | 第36页 |
| 3.1.3 双酶切及目的片段的回收 | 第36-37页 |
| 3.1.4 表达载体连接及热激大肠杆菌 | 第37页 |
| 3.1.5 阳性克隆的筛选及双酶切验证 | 第37页 |
| 3.1.6 重组质粒转化农杆菌EHA105 并筛选鉴定 | 第37页 |
| 3.2 类黄酮生物合成相关基因干涉载体的构建 | 第37-40页 |
| 3.2.1 NtLAR和NtANS基因amiRNA载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.2.2 Gateway法构建NtFLS和Nt（LAR+ANR）基因RNAi载体 | 第39-40页 |
| 4 结果与分析 | 第40-46页 |
| 4.1 类黄酮生物合成相关基因超量表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 4.1.1 类黄酮生物合成相关基因的克隆 | 第40页 |
| 4.1.2 超量表达载体的构建和酶切检测 | 第40-42页 |
| 4.1.3 重组质粒转化农杆菌EHA105 | 第42页 |
| 4.2 NtLAR和NtANS基因amiRNA载体的构建 | 第42-44页 |
| 4.2.1 重组质粒双酶切检测 | 第42-43页 |
| 4.2.2 重组质粒转化农杆菌EHA105 | 第43-44页 |
| 4.3 Gateway法构建NtFLS和Nt（LAR+ANR）基因RNAi载体 | 第44-46页 |
| 4.3.1 重组质粒双酶切检测 | 第44-45页 |
| 4.3.2 LR反应阳性克隆的鉴定 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-48页 |
| 5.1 基因序列的选择 | 第46页 |
| 5.2 载体构建 | 第46-48页 |
| 第四章 前景展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 附录 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
