| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 文章综述 | 第14-28页 |
| 1.1 植物启动子的结构概述 | 第14-15页 |
| 1.2 启动子类型 | 第15-21页 |
| 1.2.1 组成型启动子 | 第15-16页 |
| 1.2.2 组织特异型启动子 | 第16-17页 |
| 1.2.3 诱导型启动子 | 第17-21页 |
| 1.3 启动子克隆方法 | 第21-23页 |
| 1.3.1 接头PCR | 第21页 |
| 1.3.2 融合嵌套PCR(FPNI-PCR) | 第21页 |
| 1.3.3 I-PCR | 第21-22页 |
| 1.3.4 P-PCR | 第22页 |
| 1.3.5 热不对称PCR | 第22-23页 |
| 1.4 启动子功能研究方法 | 第23-25页 |
| 1.4.1 生物信息学分析 | 第23-24页 |
| 1.4.2 点突变分析 | 第24页 |
| 1.4.3 遗传转化 | 第24页 |
| 1.4.4 瞬时表达 | 第24-25页 |
| 1.4.5 凝胶阻滞分析 | 第25页 |
| 1.4.6 酵母单杂交分析 | 第25页 |
| 1.5 GPAT基因及其启动子研究进展 | 第25-26页 |
| 1.6 植物抗寒研究进展 | 第26-27页 |
| 1.7 本试验的研究目的及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 岷江百合GPAT基因启动子克隆及预测分析 | 第28-46页 |
| 2.1 试验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 2.1.2 TA克隆载体与菌株 | 第28页 |
| 2.1.3 试验试剂及仪器 | 第28页 |
| 2.1.4 试验所用试剂配置方法 | 第28-29页 |
| 2.2 试验方法与过程 | 第29-34页 |
| 2.2.1 岷江组培苗 | 第29页 |
| 2.2.2 基因组DNA提取 | 第29页 |
| 2.2.3 岷江百合GPAT基因启动子扩增 | 第29-32页 |
| 2.2.4 GPAT启动子5'调控区域鉴定 | 第32-34页 |
| 2.3 结果分析 | 第34-44页 |
| 2.3.1 岷江百合组培苗的培育 | 第34页 |
| 2.3.2 岷江百合基因组DNA的提取 | 第34页 |
| 2.3.3 岷江百合GPAT基因启动子扩增 | 第34-38页 |
| 2.3.4 GPAT基因5'调控全长序列扩增及分析 | 第38-40页 |
| 2.3.5 GPAT基因启动子的结构预测分析 | 第40-44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-46页 |
| 2.4.1 克隆启动子过程中需要注意的问题 | 第44页 |
| 2.4.2 启动子序列分析 | 第44-46页 |
| 第三章 岷江百合GPAT基因启动子缺失载体构建 | 第46-54页 |
| 3.1 试验材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第46页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第46页 |
| 3.1.3 试验仪器 | 第46-47页 |
| 3.2 试验方法 | 第47-49页 |
| 3.2.1 GPAT基因启动子5'端缺失片段的克隆 | 第47-48页 |
| 3.2.2 重组表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-52页 |
| 3.3.1 GPAT启动子5'缺失片段克隆 | 第49-50页 |
| 3.3.2 缺失重组质粒与pCAMBIA 3301表达载体的双酶切 | 第50-51页 |
| 3.3.3 重组表达载体的构建与检测 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 岷江百合GPAT基因启动子融合载体的烟草转化 | 第54-60页 |
| 4.1 试验材料 | 第54页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第54页 |
| 4.1.2 菌株与植物表达载体 | 第54页 |
| 4.1.3 试验药品 | 第54页 |
| 4.1.4 试验仪器 | 第54页 |
| 4.2 试验方法 | 第54-56页 |
| 4.2.1 培养烟草组培苗 | 第54页 |
| 4.2.2 农杆菌介导的烟草转化 | 第54-56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-58页 |
| 4.3.1 工程菌菌落PCR鉴定结果 | 第56-57页 |
| 4.3.2 GUS报告基因瞬时表达结果分析 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 附录 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第78页 |
