| 摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第14-26页 |
| 1.1 影响猪卵母细胞冷冻的因素 | 第14-18页 |
| 1.1.1 冷冻保存的原理 | 第14-15页 |
| 1.1.2 冷冻保护剂类型 | 第15-16页 |
| 1.1.3 不同冷冻载体对冷冻效果的影响 | 第16-17页 |
| 1.1.4 细胞不同发育阶段对冷冻效果的影响 | 第17-18页 |
| 1.2 冷冻对卵母细胞超微结构和发育能力的影响 | 第18-21页 |
| 1.2.1 冷冻对线粒体的损伤 | 第18-19页 |
| 1.2.2 冷冻对皮质颗粒的损伤 | 第19页 |
| 1.2.3 冷冻对透明带的损伤 | 第19-20页 |
| 1.2.4 冷冻对细胞膜的损伤 | 第20页 |
| 1.2.5 冷冻对细胞骨架的损伤 | 第20页 |
| 1.2.6 冷冻对微绒毛的损伤 | 第20-21页 |
| 1.3 冷冻对于卵母细胞发育能力的影响 | 第21页 |
| 1.4 冷冻对卵母细胞DNA甲基化的影响 | 第21-22页 |
| 1.5 冷冻对卵母细胞组蛋白乙酰化的影响 | 第22页 |
| 1.6 印记基因在胚胎发育及育种中的作用 | 第22-23页 |
| 1.6.1 印记基因的功能 | 第22页 |
| 1.6.2 印记基因的建立时期 | 第22-23页 |
| 1.6.3 印记基因与人类疾病 | 第23页 |
| 1.6.4 印记基因在育种中的应用 | 第23页 |
| 1.7 卵母细胞中母源因子的作用 | 第23-25页 |
| 1.7.1 母源因子的积累 | 第23页 |
| 1.7.2 胚胎基因组的转录和激活 | 第23-25页 |
| 1.7.3 冷冻对细胞内母源因子的影响 | 第25页 |
| 1.8 研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第26页 |
| 2.1.2 实验仪器与耗材 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第27-28页 |
| 2.2 试验方法 | 第28-34页 |
| 2.2.1 卵巢采集 | 第28页 |
| 2.2.2 母细胞采集 | 第28页 |
| 2.2.3 母细胞体外培养 | 第28-29页 |
| 2.2.4 母细胞体外成熟判定方法 | 第29页 |
| 2.2.5 母细胞孤雌激活 | 第29页 |
| 2.2.6 胎的体外培养 | 第29页 |
| 2.2.7 母细胞RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.8 RNA质量检测 | 第30页 |
| 2.2.9 RT-PCR反应及c DNA质量检测 | 第30-31页 |
| 2.2.10 Realtime PCR引物的设计与合成 | 第31页 |
| 2.2.11 Realtime PCR检测 | 第31-32页 |
| 2.2.12 猪卵母细胞玻璃化冷冻 | 第32页 |
| 2.2.13 线粒体分布荧光染色 | 第32-33页 |
| 2.2.14 冷冻液毒性检测 | 第33页 |
| 2.2.15 卵母细胞活性检测 | 第33页 |
| 2.2.16 卵母细胞去脂肪微滴 | 第33页 |
| 2.2.17 活性氧水平检测 | 第33页 |
| 2.2.18 冷冻载体制备 | 第33-34页 |
| 2.3 实验设计 | 第34-35页 |
| 2.3.1 冷冻液不同浓度对卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第34页 |
| 2.3.2 冷冻液中添加不同糖类对卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第34页 |
| 2.3.3 卵丘细胞对卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第34-35页 |
| 2.3.4 不同载体对卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响 | 第35页 |
| 2.3.5 大分子物质对猪卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第35页 |
| 2.3.6 机械化去脂肪对卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响 | 第35页 |
| 2.3.7 猪卵母细胞玻璃化冷冻对细胞内重要母源因子表达量的影响 | 第35页 |
| 2.4 统计分析 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-49页 |
| 3.1 冷冻液不同浓度对卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第36页 |
| 3.2 冷冻液中不同糖类对卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第36-37页 |
| 3.3 卵丘细胞对卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第37页 |
| 3.4 不同载体对卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第37-38页 |
| 3.5 冷冻液中添加大分子物质对卵母细胞冷冻效果的影响 | 第38-41页 |
| 3.5.1 冷冻液中添加大分子物质对卵母细胞毒性的影响 | 第38页 |
| 3.5.2 冷冻液中大分子物质对冷冻后卵母细胞线粒体分布的影响 | 第38-39页 |
| 3.5.3 冷冻液中添加大分子物质对冷冻后卵母细胞活性的影响 | 第39-40页 |
| 3.5.4 冷冻液中添加SPS对玻璃化冷冻后卵母细胞体外发育的影响 | 第40-41页 |
| 3.6 机械去脂肪对玻璃化冷冻后卵母细胞的线粒体分布，ROS活性以及发育能力的影响 | 第41-44页 |
| 3.6.1 卵母细胞去脂肪后玻璃化冷冻对线粒体分布的影响 | 第41页 |
| 3.6.2 玻璃化冷冻对活性氧水平的影响 | 第41-42页 |
| 3.6.3 去脂肪后玻璃化冷冻对卵母细胞孤雌激活的影响 | 第42-44页 |
| 3.7 玻璃化冷冻对细胞母源因子MRNA表达水平的影响 | 第44-49页 |
| 3.7.1 玻璃化冷冻后总RNA质量检测 | 第44-45页 |
| 3.7.2 c DNA质量检测 | 第45页 |
| 3.7.3 Realtime PCR引物质量检测 | 第45-47页 |
| 3.7.4 猪卵母细胞玻璃化冷冻对细胞内母源因子相对表达量的影响 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-58页 |
| 4.1 不同浓度冷冻液对卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第49页 |
| 4.2 冷冻液中添加不同糖类对卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第49-50页 |
| 4.3 卵丘细胞对卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第50页 |
| 4.4 不同冷冻载体对卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第50-51页 |
| 4.5 大分子物质对猪卵母细胞玻璃化冷冻的影响 | 第51-53页 |
| 4.6 机械去脂肪对玻璃化冷冻后卵母细胞的线粒体分布，ROS活性以及发育能力的影响 | 第53-54页 |
| 4.7 卵母细胞玻璃化冷冻对细胞中母源因子MRNA水平表达的影响 | 第54-58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-71页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第71页 |
