| 中文摘要 | 第12-15页 |
| ABSTRACT | 第15-18页 |
| 符号说明 | 第19-20页 |
| 前言 | 第20-30页 |
| 1 氨肽酶N与肿瘤的关系 | 第20-22页 |
| 1.1 降解细胞外基质,促进原发肿瘤的生长侵袭转移 | 第20-21页 |
| 1.2 促进肿瘤细胞新血管生成 | 第21-22页 |
| 2 氨肽酶N抑制剂 | 第22-23页 |
| 2.1 APN的天然抑制剂 | 第22-23页 |
| 2.2 APN的小分子合成类抑制剂 | 第23页 |
| 3 氨肽酶N及其抑制剂的活性测定方法 | 第23-24页 |
| 4 毛细管电泳法在酶反应动力学研究中的应用 | 第24-28页 |
| 4.1 毛细管电泳在酶反应测定中的应用模式 | 第24-25页 |
| 4.2 电泳调控微分析法在酶反应测定中的应用 | 第25-28页 |
| 5 毛细管电泳法在药物与细胞膜作用研究中的应用 | 第28页 |
| 5.1 细胞膜与药物的相互作用 | 第28页 |
| 5.2 细胞膜毛细管电泳法 | 第28页 |
| 6 本课题研究目的及主要内容 | 第28-30页 |
| 第一章 氨肽酶N抑制剂电泳调控微分析筛选方法的研究和应用 | 第30-56页 |
| 1 仪器与材料 | 第31-32页 |
| 1.1 仪器 | 第31页 |
| 1.2 材料 | 第31页 |
| 1.3 电泳条件 | 第31-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-36页 |
| 2.1 溶液的配制 | 第32-33页 |
| 2.2 毛细管柱的维护 | 第33页 |
| 2.3 EMMA步骤 | 第33-34页 |
| 2.4 氨肽酶N活性研究 | 第34页 |
| 2.5 氨肽酶N抑制剂抑制动力学研究及抑制剂的筛选 | 第34-35页 |
| 2.6 酶标法 | 第35-36页 |
| 3 结果与讨论 | 第36-54页 |
| 3.1 检测波长的选择 | 第36页 |
| 3.2 分离条件的优化与选择 | 第36-42页 |
| 3.2.1 电泳分离模式的选择 | 第37-38页 |
| 3.2.2 分离缓冲液中脱氧胆酸钠浓度的考察 | 第38-39页 |
| 3.2.3 分离缓冲溶液HEPES浓度的考察 | 第39-40页 |
| 3.2.4 分离缓冲溶液pH影响 | 第40-41页 |
| 3.2.5 电泳温度的考察 | 第41页 |
| 3.2.6 分离电压的考察 | 第41-42页 |
| 3.3 EMMA条件的优化 | 第42-46页 |
| 3.3.1 混合条件的选择 | 第42-44页 |
| 3.3.2 酶促反应时间的考察 | 第44-45页 |
| 3.3.3 底物浓度的考察 | 第45-46页 |
| 3.4 方法验证 | 第46-47页 |
| 3.5 氨肽酶N的K_m和V_(max)的测定 | 第47页 |
| 3.5.1 酶标法测定氨肽酶N的K_m和V_(max) | 第47页 |
| 3.5.2 EMMA法测定氨肽酶N的K_m和V_(max) | 第47页 |
| 3.6 阳性抑制剂APN抑制动力学分析 | 第47-50页 |
| 3.7 抑制剂筛选 | 第50-54页 |
| 3.7.1 初筛 | 第50-52页 |
| 3.7.2 复筛 | 第52-53页 |
| 3.7.3 筛选结果分析 | 第53-54页 |
| 4 小结 | 第54-56页 |
| 第二章 氨肽酶N细胞膜毛细管电泳法的建立与药物筛选 | 第56-74页 |
| 1 仪器与材料 | 第56-57页 |
| 1.1 仪器 | 第56-57页 |
| 1.2 材料 | 第57页 |
| 1.3 电泳条件 | 第57页 |
| 2 实验方法 | 第57-64页 |
| 2.1 溶液的配制 | 第57-59页 |
| 2.2 细胞培养 | 第59-60页 |
| 2.3 细胞膜的制备 | 第60-62页 |
| 2.3.1 细胞膜的分离提取 | 第60页 |
| 2.3.2 细胞膜破碎方法的考察 | 第60-61页 |
| 2.3.3 细胞膜表征 | 第61-62页 |
| 2.4 细胞膜CE法 | 第62页 |
| 2.5 模型的验证 | 第62-63页 |
| 2.6 细胞膜APN动力学参数测定 | 第63页 |
| 2.7 精密度考察 | 第63页 |
| 2.8 抑制剂的筛选 | 第63-64页 |
| 3 结果与讨论 | 第64-72页 |
| 3.1 细胞膜制备 | 第64-66页 |
| 3.1.1 细胞膜分离提取 | 第64-65页 |
| 3.1.2 细胞膜的表征 | 第65-66页 |
| 3.2 筛选模型的验证 | 第66-69页 |
| 3.3 测定细胞膜表面氨肽酶N的K_m | 第69页 |
| 3.4 精密度考察 | 第69页 |
| 3.5 抑制剂筛选 | 第69-72页 |
| 3.5.1 初筛 | 第69-71页 |
| 3.5.2 复筛 | 第71-72页 |
| 4 小结 | 第72-74页 |
| 全文总结 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第85-86页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第86页 |
