| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 丹参 | 第12页 |
| 1.1.1 丹参概况 | 第12页 |
| 1.1.2 丹参的药用价值和研究现状 | 第12页 |
| 1.2 植物多酚氧化酶的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 PPO基因结构 | 第13页 |
| 1.2.2 PPO基因的表达和调控 | 第13页 |
| 1.2.3 PPO的结构特点 | 第13-14页 |
| 1.2.4 PPO的生理特性 | 第14-15页 |
| 1.3 酵母双杂交 | 第15-17页 |
| 1.3.1 cDNA文库 | 第15-16页 |
| 1.3.2 酵母双杂交系统 | 第16-17页 |
| 1.4 研究方法 | 第17-18页 |
| 1.4.1 构建过表达与反义表达载体 | 第17页 |
| 1.4.2 转化 | 第17-18页 |
| 1.5 研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 1.6 技术路线 | 第19-20页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第19页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 PPO互作蛋白筛选 | 第20-48页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 材料 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 试剂及试剂盒 | 第20页 |
| 2.1.4 引物和测序 | 第20页 |
| 2.1.5 常用试剂和培养基配制 | 第20-21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-34页 |
| 2.2.1 丹参总RNA提取 | 第21-22页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第22-23页 |
| 2.2.3 目的基因的克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.4 目的片段与T载体连接 | 第24页 |
| 2.2.5 连接产物的转化 | 第24-25页 |
| 2.2.6 单克隆菌落的检测 | 第25-26页 |
| 2.2.7 构建诱饵载体 | 第26-28页 |
| 2.2.8 诱饵载体自激活和毒性检测 | 第28-30页 |
| 2.2.9 酵母双杂交筛选与PPO相互作用的蛋白 | 第30-31页 |
| 2.2.10 文库滴度和鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.11 菌落PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.12 去重复 | 第33页 |
| 2.2.13 提取酵母质粒 | 第33-34页 |
| 2.2.14 基因序列的测定与分析 | 第34页 |
| 2.3 结果分析 | 第34-48页 |
| 2.3.1 总RNA质量分析 | 第34-35页 |
| 2.3.2 重组诱饵质粒pGBKT7-PPO的表达与鉴定 | 第35页 |
| 2.3.3 酵母双杂交对照试验 | 第35-37页 |
| 2.3.4 重组诱饵质粒pGBKT7-PPO的毒性检测 | 第37页 |
| 2.3.5 重组诱饵质粒pGBKT7-PPO的自激活检测 | 第37-38页 |
| 2.3.6 文库滴度和插入片段长度鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.7 阳性克隆子筛选 | 第39-41页 |
| 2.3.8 阳性克隆子的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 2.3.9 阳性克隆酶切去重复 | 第42-43页 |
| 2.3.10 酵母质粒提取及转化大肠杆菌 | 第43-44页 |
| 2.3.11 阳性克隆测序分析 | 第44-48页 |
| 第三章 PPO过表达载体和反义载体的构建 | 第48-59页 |
| 3.1 材料与方法 | 第48-49页 |
| 3.1.1 材料 | 第48页 |
| 3.1.2 菌株及质粒 | 第48页 |
| 3.1.3 试剂及试剂盒 | 第48页 |
| 3.1.4 引物和测序 | 第48页 |
| 3.1.5 常用试剂和培养基配制 | 第48-49页 |
| 3.2 试验方法 | 第49-52页 |
| 3.2.1 目的基因的克隆 | 第49页 |
| 3.2.2 目的片段与T载体连接 | 第49页 |
| 3.2.3 连接产物转化大肠杆菌 | 第49页 |
| 3.2.4 单克隆菌落的检测 | 第49页 |
| 3.2.5 过表达和反义载体的构建 | 第49-51页 |
| 3.2.6 转化根癌农杆菌 | 第51-52页 |
| 3.2.7 菌液制备 | 第52页 |
| 3.2.8 农杆菌介导的转化 | 第52页 |
| 3.3 结果分析 | 第52-59页 |
| 3.3.1 丹参无菌苗的培养 | 第52-53页 |
| 3.3.2 过表达和反义载体构建 | 第53-54页 |
| 3.3.3 转化农杆菌的阳性鉴定 | 第54-55页 |
| 3.3.4 叶盘法侵染 | 第55-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-62页 |
| 4.1 酵母双杂交 | 第59-61页 |
| 4.2 过表达和反义载体的构建及农杆菌侵染 | 第61-62页 |
| 第五章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
