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酵母双杂交鉴定TCTP与Rheb相互作用关系并验证其功能

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
英文缩略词表第12-14页
第一章 文献综述第14-28页
    1 TCTP及其功能第14-16页
        1.1 TCTP基因及mRNA第14页
        1.2 TCTP蛋白结构第14-15页
        1.3 TCTP的功能第15-16页
    2 Rheb及其功能第16-17页
        2.1 Rheb基因及mRNA第16页
        2.2 Rheb蛋白结构第16页
        2.3 Rheb的功能第16-17页
    3 TCTP与Rheb相互关系研究概况第17-18页
        3.1 TCTP与Rheb具有相互作用第17-18页
        3.2 TCTP与Rheb没有相互作用第18页
    4 mTOR信号通路及其功能第18-20页
        4.1 mTOR的结构第18-19页
        4.2 mTOR复合物第19页
        4.3 mTOR信号通路第19-20页
        4.4 mTOR信号通路的功能第20页
    参考文献第20-28页
第二章 内蒙古白绒山羊翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因克隆及组织表达特性分析第28-37页
    1 材料第28-29页
        1.1 菌株和质粒第28页
        1.2 细胞系和组织样品第28页
        1.3 主要试剂和器材第28-29页
    2 方法第29-32页
        2.1 动物组织及细胞培养第29页
        2.2 总RNA的提取及反转录第29-30页
        2.3 内蒙古白绒山羊TCTP基因的引物设计及分子克隆第30-31页
        2.4 生物信息学分析第31页
        2.5 组织特异性表达检测第31-32页
    3 结果第32-35页
        3.1 TCTP基因克隆与序列测定第32页
        3.2 TCTP基因序列及同源性分析第32-35页
        3.3 编码蛋白分析第35页
        3.4 组织表达特异性分析第35页
    4 讨论第35-37页
第三章 TCTP与Rheb相互作用关系验证第37-50页
    第一节 免疫共沉淀(Co-IP)验证TCTP与Rheb相互作用第37-40页
        1 材料第37-38页
            1.1 细胞系第37页
            1.2 主要试剂第37-38页
        2 方法第38-39页
            2.1 细胞培养和蛋白提取第38页
            2.2 免疫共沉淀第38页
            2.3 Western blot分析第38-39页
        3 结果第39-40页
    第二节 酵母双杂交验证TCTP与Rheb相互作用第40-50页
        1 材料第40-41页
            1.1 菌株和质粒第40页
            1.2 主要试剂第40-41页
        2 方法第41-43页
            2.1 TCTP酵母双杂交诱饵载体和靶载体的构建与鉴定第41页
            2.2 酵母感受态制备第41-42页
            2.3 重组诱饵载体、靶载体转化感受态酵母第42页
            2.4 阳性菌的PCR鉴定第42页
            2.5 重组诱饵载体pGBKT7-TCTP的毒性与自激活检测第42页
            2.6 酵母交配及各轮验证第42-43页
        3 结果第43-47页
            3.1 TCTP酵母双杂交诱饵表达载体和靶载体的构建第43页
            3.2 酵母转化结果及载体毒性检测第43页
            3.3 转化菌的PCR鉴定第43-45页
            3.4 重组诱饵载体pGBKT7-TCTP的自激活检测第45页
            3.5 酵母双杂交及各轮验证结果第45-47页
        4 讨论第47-50页
第四章 TCTP基因功能的初步研究第50-62页
    第一节 TCTP对mTOR信号通路的调控作用第50-58页
        1 材料第50-51页
            1.1 细胞系第50页
            1.2 菌株和质粒第50页
            1.3 主要试剂第50-51页
        2 方法第51-53页
            2.1 绒山羊TCTP基因过表达载体的构建与提取第51页
            2.2 绒山羊TCTP基因干扰载体的构建与提取第51-52页
            2.3 细胞培养及转染第52页
            2.4 定量RT-PCR检测不同干扰载体的干扰效果第52页
            2.5 蛋白提取第52-53页
            2.6 Western blot分析第53页
        3 结果第53-58页
            3.1 绒山羊TCTP基因过表达载体的构建第53-54页
            3.2 绒山羊TCTP基因干扰载体的构建第54页
            3.3 转染不同干扰载体的定量RT-PCR结果第54-56页
            3.4 TCTP基因过表达载体和干扰载体转染GFb第56页
            3.5 TCTP基因过表达和干扰对mTOR信号通路活性的影响第56-58页
    第二节 TCTP对GFb细胞周期的影响第58-62页
        1 材料第58-59页
            1.1 细胞系第58页
            1.2 菌株和质粒第58页
            1.3 主要试剂第58-59页
        2 方法第59页
            2.1 细胞培养及转染第59页
            2.2 细胞PI染色和流式分析第59页
        3 结果第59-60页
        4 讨论第60-62页
结论第62-63页
致谢第63-64页
攻读硕士期间发表的学术论文第64-65页
附录第65-66页

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