| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-28页 |
| 1 TCTP及其功能 | 第14-16页 |
| 1.1 TCTP基因及mRNA | 第14页 |
| 1.2 TCTP蛋白结构 | 第14-15页 |
| 1.3 TCTP的功能 | 第15-16页 |
| 2 Rheb及其功能 | 第16-17页 |
| 2.1 Rheb基因及mRNA | 第16页 |
| 2.2 Rheb蛋白结构 | 第16页 |
| 2.3 Rheb的功能 | 第16-17页 |
| 3 TCTP与Rheb相互关系研究概况 | 第17-18页 |
| 3.1 TCTP与Rheb具有相互作用 | 第17-18页 |
| 3.2 TCTP与Rheb没有相互作用 | 第18页 |
| 4 mTOR信号通路及其功能 | 第18-20页 |
| 4.1 mTOR的结构 | 第18-19页 |
| 4.2 mTOR复合物 | 第19页 |
| 4.3 mTOR信号通路 | 第19-20页 |
| 4.4 mTOR信号通路的功能 | 第20页 |
| 参考文献 | 第20-28页 |
| 第二章 内蒙古白绒山羊翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因克隆及组织表达特性分析 | 第28-37页 |
| 1 材料 | 第28-29页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第28页 |
| 1.2 细胞系和组织样品 | 第28页 |
| 1.3 主要试剂和器材 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-32页 |
| 2.1 动物组织及细胞培养 | 第29页 |
| 2.2 总RNA的提取及反转录 | 第29-30页 |
| 2.3 内蒙古白绒山羊TCTP基因的引物设计及分子克隆 | 第30-31页 |
| 2.4 生物信息学分析 | 第31页 |
| 2.5 组织特异性表达检测 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-35页 |
| 3.1 TCTP基因克隆与序列测定 | 第32页 |
| 3.2 TCTP基因序列及同源性分析 | 第32-35页 |
| 3.3 编码蛋白分析 | 第35页 |
| 3.4 组织表达特异性分析 | 第35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 TCTP与Rheb相互作用关系验证 | 第37-50页 |
| 第一节 免疫共沉淀(Co-IP)验证TCTP与Rheb相互作用 | 第37-40页 |
| 1 材料 | 第37-38页 |
| 1.1 细胞系 | 第37页 |
| 1.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-39页 |
| 2.1 细胞培养和蛋白提取 | 第38页 |
| 2.2 免疫共沉淀 | 第38页 |
| 2.3 Western blot分析 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-40页 |
| 第二节 酵母双杂交验证TCTP与Rheb相互作用 | 第40-50页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-43页 |
| 2.1 TCTP酵母双杂交诱饵载体和靶载体的构建与鉴定 | 第41页 |
| 2.2 酵母感受态制备 | 第41-42页 |
| 2.3 重组诱饵载体、靶载体转化感受态酵母 | 第42页 |
| 2.4 阳性菌的PCR鉴定 | 第42页 |
| 2.5 重组诱饵载体pGBKT7-TCTP的毒性与自激活检测 | 第42页 |
| 2.6 酵母交配及各轮验证 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-47页 |
| 3.1 TCTP酵母双杂交诱饵表达载体和靶载体的构建 | 第43页 |
| 3.2 酵母转化结果及载体毒性检测 | 第43页 |
| 3.3 转化菌的PCR鉴定 | 第43-45页 |
| 3.4 重组诱饵载体pGBKT7-TCTP的自激活检测 | 第45页 |
| 3.5 酵母双杂交及各轮验证结果 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 第四章 TCTP基因功能的初步研究 | 第50-62页 |
| 第一节 TCTP对mTOR信号通路的调控作用 | 第50-58页 |
| 1 材料 | 第50-51页 |
| 1.1 细胞系 | 第50页 |
| 1.2 菌株和质粒 | 第50页 |
| 1.3 主要试剂 | 第50-51页 |
| 2 方法 | 第51-53页 |
| 2.1 绒山羊TCTP基因过表达载体的构建与提取 | 第51页 |
| 2.2 绒山羊TCTP基因干扰载体的构建与提取 | 第51-52页 |
| 2.3 细胞培养及转染 | 第52页 |
| 2.4 定量RT-PCR检测不同干扰载体的干扰效果 | 第52页 |
| 2.5 蛋白提取 | 第52-53页 |
| 2.6 Western blot分析 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-58页 |
| 3.1 绒山羊TCTP基因过表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.2 绒山羊TCTP基因干扰载体的构建 | 第54页 |
| 3.3 转染不同干扰载体的定量RT-PCR结果 | 第54-56页 |
| 3.4 TCTP基因过表达载体和干扰载体转染GFb | 第56页 |
| 3.5 TCTP基因过表达和干扰对mTOR信号通路活性的影响 | 第56-58页 |
| 第二节 TCTP对GFb细胞周期的影响 | 第58-62页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 1.1 细胞系 | 第58页 |
| 1.2 菌株和质粒 | 第58页 |
| 1.3 主要试剂 | 第58-59页 |
| 2 方法 | 第59页 |
| 2.1 细胞培养及转染 | 第59页 |
| 2.2 细胞PI染色和流式分析 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
