| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 引言 | 第11-30页 |
| 1 Six转录因子家族 | 第11-12页 |
| 2 Six转录因子蛋白结构 | 第12-15页 |
| 2.1 同源异型结构域(HD区) | 第12-13页 |
| 2.2 蛋白互作结构域(SD区) | 第13-14页 |
| 2.3 不保守区(转录活性区) | 第14-15页 |
| 3 Six基因家族的系统进化与表达模式 | 第15-19页 |
| 4 Six1/2 功能的研究进展 | 第19-22页 |
| 4.1 Six1/2 基因在个体水平上的作用 | 第20-21页 |
| 4.2 Six1/2 基因的调控网络 | 第21-22页 |
| 5 侧线系统的起源与发育 | 第22-26页 |
| 6 Wnt信号通路 | 第26-29页 |
| 6.1 经典Wnt信号通路 | 第27页 |
| 6.2 Wnt通路拮抗分子DKK | 第27-28页 |
| 6.3 Wnt通路对斑马鱼侧线系统发育的调控 | 第28-29页 |
| 7 本研究技术路线 | 第29-30页 |
| 第二章 189b转基因斑马鱼的增强子诱捕鉴定 | 第30-48页 |
| 1 材料与方法 | 第30-41页 |
| 1.1 材料 | 第30-31页 |
| 1.1.1 实验用鱼 | 第30页 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器 | 第30-31页 |
| 1.2 方法 | 第31-41页 |
| 1.2.1 Imaging for embroys of 189b zebrafish | 第31页 |
| 1.2.2 冰冻切片制备与荧光免疫组织化学 | 第31-33页 |
| 1.2.3 染色体步移 | 第33-36页 |
| 1.2.4 whole mount in situ hybridization | 第36-41页 |
| 2 结果 | 第41-46页 |
| 2.1 189b转基因斑马鱼胚胎中绿色荧光蛋白（EGFP）的表达 | 第41-43页 |
| 2.2 免疫荧光 | 第43-44页 |
| 2.3 EGFP的插入位点 | 第44-45页 |
| 2.4 Six2b基因的表达模式 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 Wnt信号通过调控侧线基板形成影响侧线发育 | 第48-60页 |
| 1 材料与方法 | 第48-50页 |
| 1.1 材料 | 第48页 |
| 1.1.1 实验用鱼 | 第48页 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器 | 第48页 |
| 1.2 方法 | 第48-50页 |
| 1.2.1 热激处理胚胎 | 第48-49页 |
| 1.2.2 荧光显微镜观察热激处理后的胚胎 | 第49页 |
| 1.2.3 原位杂交 | 第49页 |
| 1.2.4 YO-PRO-1 染色和毛细胞计数 | 第49页 |
| 1.2.5 神经丘的碱性磷酸酶染色 | 第49-50页 |
| 1.2.6 预测基因Six2b上游启动子区域中LEF1和TCF7L2的结合位点 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-58页 |
| 2.1 YO-PRO-1 染色标记神经丘毛细胞 | 第50-51页 |
| 2.2 Wnt信号通路调控斑马鱼的侧线系统发育 | 第51-53页 |
| 2.3 Wnt信号通路调控 189b胚胎中EGFP的表达 | 第53-54页 |
| 2.4 Wnt信号对Six2b和Eya1的表达调控 | 第54-56页 |
| 2.5 预测基因Six2b上游启动子区域中LEF1和TCF7L2的结合位点 | 第56-58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 利用CRISPR/ Cas9技术敲除Six2b基因 | 第60-70页 |
| 1 材料与方法 | 第60-66页 |
| 1.1 材料 | 第60-61页 |
| 1.1.1 实验用鱼 | 第60页 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器 | 第60-61页 |
| 1.2 方法 | 第61-66页 |
| 1.2.1 Cas9靶点的选择 | 第61页 |
| 1.2.2 制备Cas9 mRNA和gRNA | 第61-63页 |
| 1.2.3 Cas9 mRNA和gRNA显微注射 | 第63-64页 |
| 1.2.4 靶点突变效率检测 | 第64-65页 |
| 1.2.5 检测F0的germline transmission | 第65页 |
| 1.2.6 筛选携带靶位点突变的F1成鱼 | 第65-66页 |
| 2 结果 | 第66-70页 |
| 2.1 靶点突变效率检测 | 第66-67页 |
| 2.2 PCR产物的酶切鉴定 | 第67-68页 |
| 2.3 检测F0的germline transmission | 第68页 |
| 2.4 筛选携带靶位点突变的F1成鱼 | 第68-70页 |
| 总结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
