| 摘要 | 第2-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 第一部分 Fas-siRNA-慢病毒载体的构建 | 第10-24页 |
| 材料与方法 | 第11-20页 |
| 1 实验器材 | 第11页 |
| 2 实验试剂 | 第11-12页 |
| 3 细胞来源 | 第12页 |
| 4 实验方法 | 第12-13页 |
| 5 Fas-siRNA慢病毒载体的构建 | 第13-19页 |
| 5.1 Fas-siRNA的设计与合成 | 第13页 |
| 5.2 Fas-siRNA干扰效率验证 | 第13-16页 |
| 5.3 pLVX-shRNA-EBFP-hFas质粒构建 | 第16-17页 |
| 5.4 LV-shRNA-EBFP-hFas慢病毒包装 | 第17-19页 |
| 5.5 慢病毒滴度测定 | 第19页 |
| 6 统计学方法 | 第19-20页 |
| 结果 | 第20-23页 |
| 1 细胞复苏后形态观察 | 第20页 |
| 2 实时荧光定量PCR检测Fas干扰效果 | 第20-21页 |
| 3 pLVX-shRNA-EBFP-hFas质粒酶切鉴定 | 第21-22页 |
| 4 基因测序 | 第22页 |
| 5 慢病毒滴度测定结果 | 第22-23页 |
| 讨论 | 第23-24页 |
| 第二部分 Sox9、Fas基因联合体外转染人退变髓核细胞的生物学效应 | 第24-40页 |
| 材料与方法 | 第25-32页 |
| 1 实验仪器 | 第25页 |
| 2 实验试剂 | 第25-26页 |
| 3 目的基因及其载体的来源 | 第26页 |
| 4 试验方法及分组 | 第26-31页 |
| 4.1 试验方法 | 第26页 |
| 4.2 实验分组 | 第26-27页 |
| 4.3 病毒分组转染髓核细胞 | 第27页 |
| 4.4 慢病毒转染效率评价 | 第27页 |
| 4.5 CCK8检测细胞增殖 | 第27-28页 |
| 4.6 Real-Time PCR检测Sox9、Fas、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的mRNA表达水平 | 第28页 |
| 4.7 Western-Blot检测Ⅱ型胶原和蛋白多糖蛋白表达水平 | 第28-31页 |
| 5 统计学方法 | 第31-32页 |
| 结果 | 第32-38页 |
| 1 慢病毒载体的转染效率 | 第32页 |
| 2 CCK8检测细胞增殖 | 第32-33页 |
| 3 Real-Time PCR检测Sox9、Fas、Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA表达 | 第33-36页 |
| 4 Western-Blot检测Ⅱ型胶原和蛋白多糖蛋白表达 | 第36-38页 |
| 讨论 | 第38-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 综述 Sox9和Fas与退变椎间盘的基因治疗 | 第43-52页 |
| 综述参考文献 | 第49-52页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
