| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 1,3-丙二醇的简介和应用价值 | 第10-11页 |
| 1.2 1,3-丙二醇的合成方法 | 第11-15页 |
| 1.2.1 化学法生产1,3-丙二醇 | 第11-12页 |
| 1.2.2 生物法生产1,3-丙二醇 | 第12-15页 |
| 1.3 生物法生产1,3-丙二醇的研究进展 | 第15-20页 |
| 1.3.1 副产物对1,3-丙二醇生产的抑制作用 | 第16页 |
| 1.3.2 代谢工程对1,3-丙二醇生产的影响 | 第16-17页 |
| 1.3.3 同源重组技术 | 第17-19页 |
| 1.3.4 基因微调 | 第19页 |
| 1.3.5 发酵工艺优化 | 第19-20页 |
| 1.3.6 其他生产1,3-丙二醇的菌株 | 第20页 |
| 1.4 本课题的内容和意义 | 第20-22页 |
| 第2章 材料和方法 | 第22-38页 |
| 2.1 材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 引物 | 第22-23页 |
| 2.1.3 培养基 | 第23页 |
| 2.1.4 分子试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.5 化学试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.6 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 分子实验方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 微生物培养方法 | 第26页 |
| 2.2.2 菌种保藏方法 | 第26页 |
| 2.2.3 PCR扩增技术 | 第26页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳法 | 第26页 |
| 2.2.5 DNA胶回收方法 | 第26页 |
| 2.2.6 TA克隆 | 第26-27页 |
| 2.2.7 DH5α转化 | 第27页 |
| 2.2.8 质粒和基因组抽提 | 第27页 |
| 2.2.9 DNA双酶切 | 第27页 |
| 2.2.10 DNA连接 | 第27页 |
| 2.2.11 K.pneumoniae电转 | 第27-28页 |
| 2.3 发酵实验方法 | 第28-29页 |
| 2.3.1 种子培养 | 第28页 |
| 2.3.2 发酵流程 | 第28-29页 |
| 2.4 分析方法 | 第29-38页 |
| 2.4.1 菌浓测定方法 | 第29页 |
| 2.4.2 甘油(碳源)滴定方法 | 第29-30页 |
| 2.4.3 发酵液中醇类和醛类代谢产物的测定方法 | 第30-33页 |
| 2.4.4 发酵液中代谢产物有机酸的液相测定方法 | 第33-36页 |
| 2.4.5 蛋白电泳方法 | 第36-38页 |
| 第3章 强化甘油脱水酶对1,3-丙二醇发酵的影响 | 第38-49页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 表达载体dhaB-pET-tac的构建 | 第38-40页 |
| 3.2.1 抽提K.pneumonia基因组 | 第38页 |
| 3.2.2 PCR扩增dhaB基因 | 第38-39页 |
| 3.2.3 双酶切dhaB基因和pET-tac质粒 | 第39页 |
| 3.2.4 重组载体dhaB-pET-tac的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.5 表达载体dhaB-pET-tac转入和鉴定 | 第40页 |
| 3.3 克雷伯氏肺炎杆菌还原途径中关键酶的测定意义和机理 | 第40-41页 |
| 3.4 强化甘油脱水酶对乳酸缺失菌株的影响 | 第41-42页 |
| 3.4.1 测定KG2-dhaB菌株与KG2菌株的甘油脱水酶 | 第41页 |
| 3.4.2 强化甘油脱水酶对KG2菌株细胞生长和1,3-丙二醇的影响 | 第41-42页 |
| 3.5 强化甘油脱水酶对乳酸和2,3-丁二醇共同缺失菌株的影响 | 第42-44页 |
| 3.5.1 测定KG3-dhaB菌株与KG3菌株的甘油脱水酶 | 第42-43页 |
| 3.5.2 强化甘油脱水酶对KG3菌株菌体生长与1,3-丙二醇产量的影响 | 第43-44页 |
| 3.6 数据比较分析 | 第44-48页 |
| 3.6.1 关键酶的表达量数据分析 | 第44-46页 |
| 3.6.2 代谢副产物的分析 | 第46-47页 |
| 3.6.3 克雷伯氏肺炎杆菌甘油代谢还原途径分析 | 第47-48页 |
| 3.7 小结 | 第48-49页 |
| 第4章 强化醛脱氢酶对1,3-丙二醇发酵的影响 | 第49-64页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 表达载体puuC-pET-tac的构建 | 第49-51页 |
| 4.3 强化醛脱氢酶对KG2菌株的影响 | 第51-55页 |
| 4.3.1 强化醛脱氢酶对KG2菌体生长和1,3-丙二醇的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.2 强化醛脱氢酶对KG2菌株3-羟基丙酸和2,3-丁二醇的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.3 强化醛脱氢酶对KG2菌株甘油消耗量和3-羟基丙醛的影响 | 第54-55页 |
| 4.4 强化醛脱氢酶对KG3菌株的影响 | 第55-57页 |
| 4.4.1 强化醛脱氢酶对KG3菌体生长和1,3-丙二醇的影响 | 第55-56页 |
| 4.4.2 强化醛脱氢酶对KG3菌株3-羟基丙酸的影响 | 第56页 |
| 4.4.3 强化醛脱氢酶对KG3菌株甘油消耗与和3-羟基丙醛的影响 | 第56-57页 |
| 4.5 副产物以及相关数据分析 | 第57-63页 |
| 4.5.1 KG2-puuC和KG3-puuC中丙酮酸的浓度变化 | 第58-59页 |
| 4.5.2 KG2-puuC和KG3-puuC菌株中乙酸的浓度变化 | 第59-61页 |
| 4.5.3 KG2-puuC和KG3-puuC中琥珀酸浓度的变化 | 第61页 |
| 4.5.4 数据比较分析 | 第61-63页 |
| 4.6 小结 | 第63-64页 |
| 第5章 总结和展望 | 第64-66页 |
| 5.1 总结 | 第64-65页 |
| 5.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 研究成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
