| 缩略语表 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-37页 |
| 1.1 鱼腥蓝细菌PCC 7120简介 | 第12-14页 |
| 1.2 信号转导系统 | 第14-29页 |
| 1.2.1 丝氨酸/苏氨酸及酪氨酸蛋白激酶-蛋白磷酸酶系统 | 第14-16页 |
| 1.2.2 组氨酸蛋白激酶-反映调控子双组分信号转导系统 | 第16-18页 |
| 1.2.3 两种信号转导系统的关联 | 第18页 |
| 1.2.4 GAF结构域 | 第18-29页 |
| 1.3 鱼腥蓝细菌PCC 7120中的信号转导系统 | 第29-34页 |
| 1.3.1 鱼腥蓝细菌PCC 7120中的双组分信号转导系统 | 第29-30页 |
| 1.3.2 鱼腥蓝细菌PCC 7120中的蛋白激酶与蛋白磷酸酶 | 第30-31页 |
| 1.3.3 鱼腥蓝细菌PCC 7120中的GAF结构域 | 第31-32页 |
| 1.3.4 HstK家族 | 第32-34页 |
| 1.4 鱼腥蓝细菌PCC 7120的复制型穿梭载体 | 第34-36页 |
| 1.4.1 携带蓝细菌复制子的pDU1 | 第34-36页 |
| 1.4.2 革兰氏阴性细菌光谱复制型质粒RSF1010 | 第36页 |
| 1.5 研究的目的与意义 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-60页 |
| 2.1 菌株与培养 | 第37-38页 |
| 2.2 蓝细菌表达菌株的构建及表型观察 | 第38-47页 |
| 2.2.1 Pkn41-GAF、Pkn42-GAF表达质粒的构建 | 第38-42页 |
| 2.2.2 其它GAF表达质粒的构建 | 第42-43页 |
| 2.2.3 点突变Pkn41-GAF表达质粒的构建 | 第43-46页 |
| 2.2.4 三亲本杂交 | 第46-47页 |
| 2.2.5 表型观察 | 第47页 |
| 2.3 PRL25T衍生质粒拷贝数的测定 | 第47-52页 |
| 2.3.1 qPCR引物的设计 | 第47-48页 |
| 2.3.2 qPCR模板的制备 | 第48-49页 |
| 2.3.3 qPCR的体系及程序 | 第49-50页 |
| 2.3.4 qPCR标准曲线的绘制 | 第50-52页 |
| 2.3.5 相对质粒拷贝数的测定 | 第52页 |
| 2.4 大肠杆菌表达菌株的构建及X射线晶体衍射 | 第52-57页 |
| 2.4.1 大肠杆菌Pkn41-GAF表达质粒的构建 | 第52-54页 |
| 2.4.2 天然蛋白的表达 | 第54-55页 |
| 2.4.3 硒代甲硫氨酸衍生物的表达 | 第55页 |
| 2.4.4 蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| 2.4.5 蛋白的结晶 | 第56-57页 |
| 2.5 其它技术 | 第57-60页 |
| 2.5.1 Western点杂交 | 第57-58页 |
| 2.5.2 蛋白的部分酶解 | 第58页 |
| 2.5.3 二甲亚砜还原酶酶活测定 | 第58-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-97页 |
| 3.1 PKN41、PKN42的GAF结构域表达菌株的构建及表型观察 | 第60-65页 |
| 3.1.1 Pkn41、Pkn42的GAF结构域分析 | 第60页 |
| 3.1.2 pRLnr41、pRLnr42菌株的构建 | 第60-61页 |
| 3.1.3 pRLnr41、pRLnr42表达菌株的表型观察 | 第61-64页 |
| 3.1.4 Pkn41-GAF-HT的确证 | 第64-65页 |
| 3.2 各种GAF表达菌株的构建及表型观察 | 第65-68页 |
| 3.2.1 对照GAF表达菌株的构建 | 第65-66页 |
| 3.2.2 HstK家族GAF表达菌株的构建 | 第66页 |
| 3.2.3 点突变Pkn41-GAF表达菌株的构建 | 第66-68页 |
| 3.2.4 各GAF表达菌株的表型分析 | 第68页 |
| 3.3 复制型质粒拷贝数的研究 | 第68-79页 |
| 3.3.1 相对质粒拷贝数测定方法探索 | 第69-71页 |
| 3.3.2 GAF表达菌株的质粒拷贝数及对应表型 | 第71-76页 |
| 3.3.3 其它表达菌株的质粒拷贝数及对应表型 | 第76-79页 |
| 3.4 HT-PKN41-GAF的X射线晶体衍射 | 第79-97页 |
| 3.4.1 天然HT-Pkn41-GAF的表达纯化 | 第79-81页 |
| 3.4.2 天然HT-Pkn41-GAF的结晶 | 第81-85页 |
| 3.4.3 酶解Pkn41-GAF-HT的结晶 | 第85-86页 |
| 3.4.4 Pkn41-GAF、Pkn42-GAF的配体分析 | 第86-91页 |
| 3.4.5 亚克隆HT-Pkn41-GAF的结晶 | 第91-93页 |
| 3.4.6 天然HT-Pkn41-GAF结构的分子置换与同型置换 | 第93-94页 |
| 3.4.7 HT-Pkn41-GAF硒代衍生物的结晶 | 第94-97页 |
| 4 讨论 | 第97-105页 |
| 参考文献 | 第105-115页 |
| 附录 | 第115-124页 |
| 附表1 PKN41-GAF-HT的质谱验证 | 第115-122页 |
| 附表2 PKN41-GAF-HT上方不明条带的质谱检测 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
