| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-27页 |
| 1.1 蜘蛛丝简介 | 第17-19页 |
| 1.1.1 牵引丝 | 第17-18页 |
| 1.1.2 捕获丝 | 第18页 |
| 1.1.3 鞭毛状丝 | 第18页 |
| 1.1.4 包卵丝 | 第18页 |
| 1.1.5 包装丝 | 第18页 |
| 1.1.6 粘合物 | 第18-19页 |
| 1.1.7 固着丝 | 第19页 |
| 1.2 蜘蛛丝的性质与应用 | 第19-20页 |
| 1.2.1 蜘蛛丝的理化性质 | 第19页 |
| 1.2.2 蜘蛛丝的应用 | 第19-20页 |
| 1.3 蛛丝牵引丝组成蛋白结构分析 | 第20-22页 |
| 1.3.1 牵引丝的简介 | 第20页 |
| 1.3.2 牵引丝组成蛋白MaSp1、MaSp2结构分析 | 第20-22页 |
| 1.4 重组蛛丝蛋白的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.4.1 重组蛛丝蛋白的研究背景 | 第22-23页 |
| 1.4.2 重组蛛丝蛋白在微生物中的表达 | 第23页 |
| 1.4.3 重组蛛丝蛋白在哺乳动物细胞系中的表达 | 第23-24页 |
| 1.4.4 重组蛛丝蛋白在动植物中的表达 | 第24页 |
| 1.4.5 重组蛛丝蛋白在昆虫中的表达 | 第24页 |
| 1.5 研究展望 | 第24-25页 |
| 1.6 本课题的研究目的及思路 | 第25-27页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第25页 |
| 1.6.2 研究思路 | 第25-27页 |
| 第二章 蛛丝蛋白基因表达载体的构建 | 第27-51页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.1 菌株,质粒 | 第27页 |
| 2.2.2 培养基 | 第27-28页 |
| 2.2.3 试剂和仪器 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-38页 |
| 2.3.1 MaSp2基本单元基因Spin序列的选取、合成及重组载体的构建 | 第28-31页 |
| 2.3.2 Spin2串联体的合成及重组载体的构建 | 第31-34页 |
| 2.3.3 Spin4串联体的合成及重组载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.4 Spin8串联体的合成及重组载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.3.5 Spin16串联体的合成及重组载体的构建 | 第37页 |
| 2.3.6 Spin32串联体的合成及重组载体的构建 | 第37页 |
| 2.3.7 Spin64串联体的合成及重组载体的构建 | 第37-38页 |
| 2.3.8 Spin96串联体的合成及重组载体的构建 | 第38页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第38-50页 |
| 2.4.1 MaSp2基本单元基因Spin序列的设计 | 第38-40页 |
| 2.4.2 MaSp2基本单元基因Spin的合成及表达载体pET28a-Spin的构建 | 第40-41页 |
| 2.4.3 Spin2串联体序列测序及表达载体pET28a-Spin2构建 | 第41-42页 |
| 2.4.4 Spin4串联体序列测序及表达载体pET28a-Spin4构建 | 第42-44页 |
| 2.4.5 Spin8串联体序列测序及表达载体pET28a-Spin8构建 | 第44-45页 |
| 2.4.6 Spin16串联体序列测序及表达载体pET28a-Spin16构建 | 第45-46页 |
| 2.4.7 Spin32串联体序列测序及表达载体pET28a-Spin32构建 | 第46-48页 |
| 2.4.8 Spin64串联体序列测序及表达载体pET28a-Spin64构建 | 第48-49页 |
| 2.4.9 Spin96串联体序列测序及表达载体pET28a-Spin96构建 | 第49-50页 |
| 2.5 小结 | 第50-51页 |
| 第三章 蛛丝蛋白基因的表达纯化及条件优化 | 第51-63页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第51-52页 |
| 3.2.1 菌株,质粒 | 第51-52页 |
| 3.2.2 培养基与主要溶液 | 第52页 |
| 3.2.3 试剂和仪器 | 第52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-54页 |
| 3.3.1 蛛丝蛋白表达工程菌的构建 | 第52-53页 |
| 3.3.2 蛛丝蛋白工程菌的诱导表达 | 第53页 |
| 3.3.3 蛛丝蛋白工程菌表达产物的分离纯化 | 第53页 |
| 3.3.4 蛛丝蛋白工程菌表达产物的蛋白电泳验证 | 第53-54页 |
| 3.3.5 蛛丝蛋白工程菌表达产物氨基酸组分分析 | 第54页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第54-61页 |
| 3.4.1 蛛丝蛋白工程菌表达产物的SDS-PAGE蛋白电泳验证 | 第54-55页 |
| 3.4.2 蛛丝蛋白工程菌表达产物氨基酸组分分析 | 第55-56页 |
| 3.4.3 pET28a-Spin16工程菌表达条件的优化 | 第56-59页 |
| 3.4.4 pET28a-Spin16工程菌摇瓶发酵蛋白表达量的估算 | 第59-61页 |
| 3.4.5 pET28a-Spin32工程菌表达情况分析 | 第61页 |
| 3.5 小结 | 第61-63页 |
| 第四章 过表达tRNA体系的建立及高串联体蛋白的表达 | 第63-75页 |
| 4.1 引言 | 第63-64页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第64-65页 |
| 4.2.1 菌株,质粒 | 第64页 |
| 4.2.2 培养基 | 第64页 |
| 4.2.3 试剂和仪器 | 第64-65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-69页 |
| 4.3.1 丙氨酸tRNA基因的选取、合成及重组载体的构建 | 第65-67页 |
| 4.3.2 甘氨酸tRNA基因的选取、合成及重组载体的构建 | 第67-68页 |
| 4.3.3 含有质粒pET28a-Spin32和pet22b-glyVXY-alaT2因工程大肠杆菌的构建 | 第68页 |
| 4.3.4 含有双重抗性载体工程菌的表达 | 第68-69页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第69-74页 |
| 4.4.1 丙氨酸tRNA基因的选取、合成及重组载体的构建 | 第69-71页 |
| 4.4.2 甘氨酸tRNA基因的选取、合成及重组载体的构建 | 第71-72页 |
| 4.4.3 含有双重抗性载体的共表达产物的SDS-PAGE蛋白电泳验证 | 第72-73页 |
| 4.4.4 含有双重抗性载体的工程菌表达产物氨基酸组分分析 | 第73-74页 |
| 4.5 小结 | 第74-75页 |
| 第五章 重组蛛丝蛋白的高密度发酵及纺丝条件探索 | 第75-85页 |
| 5.1 引言 | 第75页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第75-76页 |
| 5.2.1 菌株,质粒 | 第75页 |
| 5.2.2 培养基与主要溶液 | 第75-76页 |
| 5.2.3 试剂和仪器 | 第76页 |
| 5.3 实验方法 | 第76-79页 |
| 5.3.1 pET28a-Spin16工程菌的高密度发酵 | 第76-77页 |
| 5.3.2 pET28a-Spin16工程菌的高密度发酵蛋白纯化 | 第77-78页 |
| 5.3.3 pET28a-Spin16蛋白的湿法纺丝 | 第78页 |
| 5.3.4 pET28a-Spin16蛋白的静电纺丝 | 第78-79页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第79-83页 |
| 5.4.1 高密度发酵表达、及纯化结果分析 | 第79-81页 |
| 5.4.2 湿法纺丝结果分析 | 第81-82页 |
| 5.4.3 静电纺丝结果分析 | 第82-83页 |
| 5.5 小结 | 第83-85页 |
| 第六章 结论与展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 附录一 实验涉及化学试剂 | 第91-93页 |
| 附录二 本实验所用设备仪器 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 研究成果及已发表的学术论文 | 第97-99页 |
| 作者及导师简介 | 第99-100页 |
| 附件 | 第100-101页 |
