| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 木质纤维素基质水解糖化 | 第9-11页 |
| 1.1.1 天然木质纤维素 | 第9-10页 |
| 1.1.2 水解糖化过程及其现状 | 第10-11页 |
| 1.2 纤维素酶 | 第11-14页 |
| 1.2.1 纤维素酶来源及其组成特点 | 第11-13页 |
| 1.2.2 商业纤维素酶现状 | 第13-14页 |
| 1.2.3 提高纤维素酶解效率的策略 | 第14页 |
| 1.3 纤维素酶蛋白Cel5A/Cel6A的异源表达 | 第14-15页 |
| 1.4 论文立题依据与研究内容 | 第15-17页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第15-16页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 材料与设备 | 第17-18页 |
| 2.1.2 溶液与培养基 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 菌株培养 | 第18-19页 |
| 2.2.2 基因优化与载体构建 | 第19-21页 |
| 2.2.3 高产菌株构建 | 第21页 |
| 2.2.4 酶学性质分析 | 第21-22页 |
| 2.2.5 重组菌株摇瓶优化 | 第22-23页 |
| 2.2.6 共表达菌株构建 | 第23-24页 |
| 2.2.7 上罐扩大培养 | 第24页 |
| 2.3 分析测定 | 第24-26页 |
| 2.3.1 纤维素酶蛋白表达分析 | 第24-25页 |
| 2.3.2 VHb蛋白活性分析 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-56页 |
| 3.1 高产Cel5A/Cel6A重组毕赤酵母构建 | 第26-33页 |
| 3.1.1 里氏木霉Cel5A/Cel6A基因优化 | 第26-28页 |
| 3.1.2 目的基因表达载体构建 | 第28-29页 |
| 3.1.3 电转化与平板筛选菌株筛选 | 第29-30页 |
| 3.1.4 摇瓶筛选及产酶验证 | 第30-32页 |
| 3.1.5 小结 | 第32-33页 |
| 3.2 重组蛋白酶学性质分析 | 第33-37页 |
| 3.2.1 最适反应pH、温度与热稳定性 | 第33-35页 |
| 3.2.2 底物特异性与酶反应动力学参数 | 第35-36页 |
| 3.2.3 化学试剂对重组蛋白酶活的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.4 小结 | 第37页 |
| 3.3 重组毕赤酵母摇瓶优化与上罐发酵 | 第37-47页 |
| 3.3.1 诱导型重组菌株P. pastoris GS115-Cel5A摇瓶优化 | 第37-39页 |
| 3.3.2 组成型重组菌株P. pastoris X33Cel5A摇瓶优化 | 第39-41页 |
| 3.3.3 诱导型重组菌株P. pastoris GS115-Cel6A摇瓶优化 | 第41-42页 |
| 3.3.4 组成型重组菌株P. pastoris X33Cel6A摇瓶优化 | 第42-44页 |
| 3.3.5 产Cel5A重组菌株上罐培养 | 第44-45页 |
| 3.3.6 产Cel6A重组菌株上罐培养 | 第45-47页 |
| 3.3.7 小结 | 第47页 |
| 3.4 双基因共表达菌株构建与表达 | 第47-56页 |
| 3.4.1 含VHb基因表达载体构建 | 第48页 |
| 3.4.2 电转化与平板初筛 | 第48-49页 |
| 3.4.3 共表达菌株摇瓶筛选 | 第49-50页 |
| 3.4.4 共表达菌株产酶验证 | 第50-51页 |
| 3.4.5 共表达菌株上罐培养 | 第51-55页 |
| 3.4.6 小结 | 第55-56页 |
| 主要结论与展望 | 第56-58页 |
| 主要结论 | 第56-57页 |
| 展望 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第64页 |
