| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| 1.1 手性化合物及其制备 | 第8页 |
| 1.1.1 手性概述 | 第8页 |
| 1.1.2 手性化合物的重要性 | 第8页 |
| 1.2 羰基还原酶不对称制备手性化合物 | 第8-9页 |
| 1.2.1 羰基还原酶 | 第8-9页 |
| 1.2.2 羰基还原酶工业化生产的限制因素 | 第9页 |
| 1.3 辅酶再生的相关策略及其应用 | 第9-11页 |
| 1.3.1 氧化还原反应中辅酶再生循环 | 第9-10页 |
| 1.3.2 基于全细胞水平上的辅酶循环策略 | 第10-11页 |
| 1.3.3 葡萄糖脱氢酶用于辅酶再生的应用 | 第11页 |
| 1.4 基因工程技术用于天然酶改造 | 第11-13页 |
| 1.4.1 定点突变改造羰基还原酶 | 第12-13页 |
| 1.4.2 定向进化改造羰基还原酶 | 第13页 |
| 1.5 课题研究的主要内容和意义 | 第13-15页 |
| 1.5.1 课题研究的意义 | 第13-14页 |
| 1.5.2 课题研究的主要内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.4 培养基与相关溶液 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-23页 |
| 2.2.1 RCR与GDH共表达体系的构建 | 第17-19页 |
| 2.2.2 共表达菌株的表达条件优化及动力学测定 | 第19-21页 |
| 2.2.3 共表达菌株不对成转化条件的优化 | 第21页 |
| 2.2.4 高通量筛选高表达菌株方法的建立 | 第21-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-38页 |
| 3.1 RCR与GDH共表达体系的构建 | 第23-27页 |
| 3.1.1 共表达体系的构建 | 第23-24页 |
| 3.1.2 蛋白在不同宿主中的表达分析 | 第24-25页 |
| 3.1.3 蛋白在不同宿主中的酶活及生物转化分析 | 第25-26页 |
| 3.1.4 共表达葡萄糖脱氢酶对宿主菌生长的影响 | 第26-27页 |
| 3.2 共表达菌株的表达条件优化 | 第27-32页 |
| 3.2.1 诱导时机对共表达菌株表达量的影响 | 第27页 |
| 3.2.2 诱导剂浓度对共表达菌株表达量的影响 | 第27-28页 |
| 3.2.3 诱导温度对共表达菌株表达量的影响 | 第28-29页 |
| 3.2.4 诱导时间对共表达菌株表达量的影响 | 第29-30页 |
| 3.2.5 共表达蛋白的分离纯化 | 第30-31页 |
| 3.2.6 共表达体系中RCR及GDH的动力学测定 | 第31-32页 |
| 3.3 共表达菌株不对称转化条件的优化 | 第32-35页 |
| 3.3.1 共表达菌株生物转化反应的最适反应温度 | 第32-33页 |
| 3.3.2 共表达菌株生物转化反应的最适反应pH | 第33-34页 |
| 3.3.3 共表达菌株生物转化反应的最佳反应时间 | 第34-35页 |
| 3.4 高通量筛选高酶活RCR突变体方法的建立 | 第35-38页 |
| 3.4.1 紫外扫描波长测定 | 第35-36页 |
| 3.4.2 标准曲线的绘制 | 第36页 |
| 3.4.3 重组菌还原 2-羟基苯乙酮量的检测 | 第36-37页 |
| 3.4.4 易错PCR方法建立突变文库及高酶活菌株的筛选 | 第37-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-39页 |
| 主要结论 | 第38页 |
| 展望 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第44页 |