| 英文缩写一览表 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| ·肿瘤的基因治疗现状 | 第14-17页 |
| ·基因治疗的基因导入方法 | 第15-16页 |
| ·肿瘤基因治疗的现状和存在的问题 | 第16-17页 |
| ·肿瘤的转移机制 | 第17-19页 |
| ·肿瘤转移的主要步骤 | 第18页 |
| ·肿瘤转移的分子生物学基础 | 第18-19页 |
| ·肿瘤转移蛋白——基质金属蛋白酶 | 第19-21页 |
| ·基质金属蛋白酶的种类和结构 | 第19页 |
| ·金属酶组织抑制剂的种类和结构 | 第19-20页 |
| ·基质金属蛋白酶9(MMP-9) | 第20-21页 |
| ·恶性黑色素瘤 | 第21-24页 |
| ·恶性黑色素瘤现有的治疗策略及治疗评价 | 第21-22页 |
| ·恶·性黑色素瘤基因治疗新策略——RNAi | 第22-24页 |
| 第二章 引言 | 第24-26页 |
| 第三章 B16细胞MMP9基因干扰序列的筛选 | 第26-48页 |
| ·材料、试剂及仪器 | 第26-30页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·试剂配制 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| ·干扰载体的构建 | 第30页 |
| ·干扰质粒DNA的扩增 | 第30-32页 |
| ·质粒转染 | 第32页 |
| ·流式细胞仪测定质粒转染率 | 第32-33页 |
| ·激光扫描共聚焦显微镜观察质粒转染情况 | 第33页 |
| ·转染后细胞RNA的提取及RNA浓度、纯度和完整度检测 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR | 第34-35页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第35页 |
| ·数据分析 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-45页 |
| ·序列设计 | 第36页 |
| ·小量抽提干扰质粒后的浓度、纯度测定 | 第36页 |
| ·转染24h、48h后倒置相差显微镜观察B16细胞形态及荧光情况 | 第36-38页 |
| ·转染24h后流式细胞仪测定各组质粒转染率 | 第38-40页 |
| ·转染48h后激光共聚焦扫描显微镜观察观察B16细胞形态及荧光情况 | 第40-41页 |
| ·转染24h、48h提取各组RNA并逆转录合成cDNA | 第41-42页 |
| ·实时荧光定量PCR筛选MMP-9干扰序列 | 第42-45页 |
| ·讨论 | 第45-48页 |
| 第四章 MMP-9干扰对B16小鼠黑色素瘤细胞侵袭转移影响的体外研究 | 第48-60页 |
| ·材料、试剂及仪器 | 第48-51页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48-50页 |
| ·试剂配制 | 第50页 |
| ·主要仪器设备 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-54页 |
| ·B16细胞培养及Mmp-9-RNAi-2#干扰载体的细胞转染 | 第51页 |
| ·细胞总蛋白的提取及蛋白浓度测定 | 第51-52页 |
| ·各组蛋白的Western blotting检测MMP-9蛋白的表达 | 第52-53页 |
| ·B16细胞细胞迁移力及侵袭力测定 | 第53-54页 |
| ·数据分析 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-57页 |
| ·各组蛋白浓度测定值 | 第54-55页 |
| ·Western blotting | 第55页 |
| ·各组细胞迁移力及侵袭力变化情况 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| 第五章 MMP-9干扰对C57BL/6小鼠恶性黑色素瘤侵袭转移的影响 | 第60-68页 |
| ·材料、试剂及仪器 | 第60-61页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60-61页 |
| ·主要仪器设备 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-62页 |
| ·小鼠爪垫皮下移植模型构建 | 第61-62页 |
| ·基因治疗混合溶液的配制 | 第62页 |
| ·体内基因治疗 | 第62页 |
| ·数据分析 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-65页 |
| ·小鼠爪垫皮下移植模型 | 第62-63页 |
| ·基因治疗对肿瘤生长及转移的影响 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
