中文摘要 | 第8-20页 |
Abstract | 第20-29页 |
符号说明 | 第30-32页 |
前言 | 第32-35页 |
材料和方法 | 第35-57页 |
1. 实验材料 | 第35-38页 |
1.1 主要试剂 | 第35-36页 |
1.2 细胞株、质粒及小鼠来源 | 第36页 |
1.3 主要仪器 | 第36-37页 |
1.4 PCR引物 | 第37-38页 |
1.5 TRIM31干扰RNA序列 | 第38页 |
2. 实验方法 | 第38-57页 |
2.1 试剂配制 | 第38-39页 |
2.2 细胞培养,复苏和冻存 | 第39-41页 |
2.3 RNA提取与反转录 | 第41-42页 |
2.4 普通PCR与实时定量PCR | 第42-43页 |
2.5 Western blot检测蛋白水平的变化 | 第43-47页 |
2.6 表达载体构建 | 第47-51页 |
2.7 点突变体的构建 | 第51-53页 |
2.8 细胞转染实验步骤 | 第53页 |
2.9 免疫共沉淀(Co-IP)实验 | 第53-54页 |
2.10 体外泛素化实验 | 第54页 |
2.11 体外蛋白的翻译 | 第54-55页 |
2.12 空斑法测定VSV/HSV-1病毒滴度 | 第55页 |
2.13 线粒体粗提 | 第55-56页 |
2.14 免疫荧光染色(细胞爬片) | 第56-57页 |
实验结果 | 第57-81页 |
1. RNA病毒感染引起TRIM31在线粒体聚集 | 第57-58页 |
2. TRIM31正向调控IFN-β的产生和抗病毒免疫 | 第58-61页 |
2.1 TRIM31干扰后抑制IFN-β的产生 | 第58页 |
2.2 TRIM31高表达促进RNA病毒介导的IFN-β的产生 | 第58-59页 |
2.3 TRIM31的抗病毒作用 | 第59-61页 |
3. TRIM31缺失在细胞水平抑制抗病毒反应 | 第61-64页 |
3.1 TRIM31缺陷抑制RNA病毒介导的IFN-β产生 | 第61-62页 |
3.2 TRIM31敲基因小鼠抑制RNA病毒介导的免疫反应 | 第62-64页 |
4. TRIM31缺失小鼠更易感染RNA病毒 | 第64-66页 |
5. TRIM31促进RLR信号通路的活化 | 第66-68页 |
6. TRIM31靶向MAVS | 第68-71页 |
7. TRIM31促进MAVS泛素化修饰 | 第71-72页 |
8. TRIM31促进MAVS的K63位泛素化修饰 | 第72-74页 |
9. TRIM31对MAVS第10位,第311位,第461位赖氨酸发进行K63位泛素素化修饰 | 第74-75页 |
10. TRIM31促进MAVS阮蛋白样多聚体的形成 | 第75-77页 |
11. 基因恢复实验检测TRIM31对MAVS多聚化形成的影响 | 第77-79页 |
12. TRIM31促进抗病毒作用的模式图 | 第79-81页 |
讨论 | 第81-83页 |
参考文献 | 第83-87页 |
攻读博士学位期间发表的论文 | 第87-88页 |
致谢 | 第88-89页 |
发表论文一 | 第89-130页 |
发表论文二 | 第130-162页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第162页 |