| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 符号及缩略说明表 | 第14-15页 |
| 第一章 综述 | 第15-31页 |
| 1 灰霉病及防治研究现状 | 第15-20页 |
| 1.1 灰葡萄孢菌概况 | 第15-16页 |
| 1.2 灰葡萄孢菌生活史 | 第16-17页 |
| 1.3 灰霉病防治研究现状 | 第17-20页 |
| 1.3.1 抗病育种 | 第17页 |
| 1.3.2 生物防治现状 | 第17页 |
| 1.3.3 农业防治 | 第17-18页 |
| 1.3.4 化学防治 | 第18-20页 |
| 2 甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂和琥珀酸脱氢酶类抑制剂抗性机制研究进展 | 第20-22页 |
| 2.1 甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂抗性机制研究进展 | 第20-21页 |
| 2.2 琥珀酸脱氢酶抑制剂抗性研究进展 | 第21-22页 |
| 3 抗性分子检测方法 | 第22-23页 |
| 4 本研究的意义 | 第23-24页 |
| 参考文献 | 第24-31页 |
| 第二章 灰葡萄孢菌对烯肟菌胺敏感性基线的建立及抗药性风险评估 | 第31-53页 |
| 1 材料与方法 | 第32-38页 |
| 1.1 供试菌株 | 第32页 |
| 1.2 供试药剂与培养基 | 第32-33页 |
| 1.3 烯肟菌胺敏感性测定 | 第33页 |
| 1.4 水杨肟酸的增强作用 | 第33-34页 |
| 1.5 烯肟菌胺对灰葡萄孢菌呼吸作用的影响 | 第34页 |
| 1.5.1 不同浓度烯肟菌胺处理对菌丝呼吸作用的影响 | 第34页 |
| 1.5.2 烯肟菌胺处理不同时间对菌丝呼吸作用的影响 | 第34页 |
| 1.6 烯肟菌胺对菌丝生长的影响 | 第34页 |
| 1.7 烯肟菌胺的保护治疗作用研究 | 第34-35页 |
| 1.7.1 保护作用测定 | 第34-35页 |
| 1.7.2 烯肟菌胺治疗作用测定 | 第35页 |
| 1.7.3 防效计算方法 | 第35页 |
| 1.8 烯肟菌胺抗性菌株的驯化及抗性稳定遗传性测定 | 第35页 |
| 1.9 交互抗性测定 | 第35-36页 |
| 1.10 抗、感菌株适合度测定 | 第36-37页 |
| 1.10.1 菌丝生长速率及产孢量测定 | 第36页 |
| 1.10.2 菌丝生长量测定 | 第36页 |
| 1.10.3 致病性测定 | 第36-37页 |
| 1.11 抗、感菌株cyt b基因序列分析 | 第37-38页 |
| 1.11.1 灰葡萄孢菌基因组DNA的提取 | 第37页 |
| 1.11.2 引物设计 | 第37页 |
| 1.11.3 cyt b基因的克隆 | 第37-38页 |
| 1.11.4 敏感与抗性菌株的测序与分析 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-48页 |
| 2.1 灰葡萄孢菌对烯肟菌胺的敏感性基线 | 第38-40页 |
| 2.2 水杨肟酸的增强作用 | 第40-41页 |
| 2.3 对菌丝呼吸作用的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.1 不同浓度烯肟菌胺处理对菌丝呼吸作用的影响 | 第41页 |
| 2.3.2 烯肟菌胺处理不同时间对菌丝呼吸作用的影响 | 第41-42页 |
| 2.4 烯肟菌胺对菌丝生长形态的影响 | 第42-43页 |
| 2.5 烯肟菌胺对灰霉病的保护治疗作用 | 第43-44页 |
| 2.6 室内药剂驯化的抗烯肟菌胺灰葡萄孢菌遗传稳定性测定 | 第44-45页 |
| 2.7 田间抗、感菌株交互抗性 | 第45页 |
| 2.8 生物适合度测定 | 第45-46页 |
| 2.9 抗、感菌株cyt b基因序列比对分析 | 第46-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 第三章 灰葡萄孢菌对氟吡菌酰胺的抗药性风险评估和抗性检测技术研究 | 第53-71页 |
| 1 材料与方法 | 第54-59页 |
| 1.1 供试菌株 | 第54-55页 |
| 1.2 供试药剂与培养基 | 第55页 |
| 1.3 灰葡萄孢菌对氟吡菌酰胺的敏感性测定 | 第55页 |
| 1.4 氟吡菌酰胺抗、感菌株生物学特性分析 | 第55-58页 |
| 1.4.1 交互抗性 | 第56页 |
| 1.4.2 菌丝生长、干重及致病性测定 | 第56-57页 |
| 1.4.3 抗、感菌株琥珀酸脱氢酶四个亚基的克隆及序列比对分析 | 第57-58页 |
| 1.5 采用含有错配碱基的ASO-PCR检测B-H272R抗性基因型菌株 | 第58-59页 |
| 1.5.1 引物设计 | 第58页 |
| 1.5.2 引物筛选 | 第58-59页 |
| 1.5.3 重复性检测 | 第59页 |
| 1.5.4 特异性检测 | 第59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-64页 |
| 2.1 灰葡萄孢菌对氟吡菌酰胺敏感性基线的建立 | 第59-60页 |
| 2.2 灰葡萄孢菌对氟吡菌酰胺抗、感菌株的生物学性质分析 | 第60-61页 |
| 2.2.1 交互抗性 | 第60页 |
| 2.2.2 菌丝生长、干重及致病性测定 | 第60-61页 |
| 2.3 抗、感菌株琥珀酸脱氢酶(SDH)序列比对分析 | 第61-62页 |
| 2.4 对氟吡菌酰胺低抗基因型SdhB_H272R的ASO-PCR检测方法的建立 | 第62-64页 |
| 2.4.1 引物筛选 | 第62-63页 |
| 2.4.2 重复性测定 | 第63页 |
| 2.4.3 不同病原菌之间的特异性评价 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 第四章 灰葡萄孢菌琥珀酸脱氢酶C亚基氨基酸多态性研究 | 第71-105页 |
| 1 材料与方法 | 第72-83页 |
| 1.1 供试菌株、质粒 | 第72-73页 |
| 1.2 供试试剂与培养基 | 第73页 |
| 1.3 灰葡萄孢菌B、C、D亚基的克隆及系统进化分析 | 第73-75页 |
| 1.4 测定C亚基多态性野生型菌株对SDHIs类药剂的敏感性 | 第75页 |
| 1.5 测定C亚基多态性野生型菌株的生物适合度 | 第75页 |
| 1.5.1 测定菌丝生长速率、产孢量 | 第75页 |
| 1.5.2 致病性测定 | 第75页 |
| 1.6 C亚基替换载体的构建 | 第75-79页 |
| 1.7 灰葡萄孢菌原生质体转化 | 第79-80页 |
| 1.7.1 原生质体的制备 | 第79-80页 |
| 1.7.2 原生质体的转化 | 第80页 |
| 1.8 转化子验证 | 第80-82页 |
| 1.8.1 药剂验证 | 第80页 |
| 1.8.2 PCR验证 | 第80-81页 |
| 1.8.3 Inverse PCRs验证 | 第81页 |
| 1.8.4 Southern杂交验证 | 第81-82页 |
| 1.9 表型分析 | 第82-83页 |
| 1.9.1 对氟吡菌酰胺、啶酰菌胺敏感性测定 | 第82页 |
| 1.9.2 对呼吸耗氧抑制率的测定 | 第82页 |
| 1.9.3 菌丝生长速率、产孢能力测定 | 第82页 |
| 1.9.4 对不同寄主的致病性测定 | 第82页 |
| 1.9.5 对不同碳源利用的测定 | 第82-83页 |
| 1.9.6 对氧化胁迫的测定 | 第83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-98页 |
| 2.1 灰葡萄孢菌SdhB、SdhC、SdhD亚基与其它病原真菌系统进化分析 | 第83-87页 |
| 2.2 田间菌株SdhB、SdhC、SdhD亚基多态性频率分布 | 第87页 |
| 2.3 C亚基多态性野生型菌株对SDHIs类药剂的敏感性 | 第87-88页 |
| 2.4 C亚基多态性野生型菌株对生物适合度的影响 | 第88-89页 |
| 2.4.1 对生长速率及产孢量的影响 | 第88页 |
| 2.4.2 在不同寄主致病性的影响 | 第88-89页 |
| 2.5 载体构建 | 第89-90页 |
| 2.6 转化子验证 | 第90-93页 |
| 2.7 5种C亚基突变体的表型分析 | 第93-98页 |
| 2.7.1 测定对氟吡菌酰胺、啶酰菌胺的敏感性 | 第93页 |
| 2.7.2 对呼吸耗氧量抑制的测定 | 第93-94页 |
| 2.7.3 菌丝生长速率及产孢能力测定 | 第94页 |
| 2.7.4 不同寄主致病性的测定 | 第94-96页 |
| 2.7.5 对不同碳源利用的测定 | 第96页 |
| 2.7.6 对氧化胁迫的影响 | 第96-98页 |
| 3 结论 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-105页 |
| 全文小结 | 第105-107页 |
| 附录一 CTAB法提取基因组DNA | 第107-109页 |
| 附录二 Southern杂交所用试剂配制及操作步骤 | 第109-113页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及专利 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
