| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-22页 |
| 1.1 甲氰菊酯杀虫剂简介 | 第9-10页 |
| 1.2 甲氰菊酯在自然环境中的代谢途径 | 第10-11页 |
| 1.3 拟除虫菊酯类农药的生物修复 | 第11-13页 |
| 1.4 光合细菌在拟除虫菊酯类农药降解中的应用 | 第13-15页 |
| 1.5 降解基因和降解酶的研究 | 第15页 |
| 1.6 蛋白的表达系统研究进展 | 第15-18页 |
| 1.7 甲氰菊酯农药残留检测方法 | 第18-21页 |
| 1.8 研究意义 | 第21-22页 |
| 第二章 光合细菌甲氰菊酯降解基因的克隆 | 第22-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-27页 |
| 2.1.1 培养基和主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22页 |
| 2.1.3 沼泽红假单胞菌的培养 | 第22-23页 |
| 2.1.4 沼泽红假单胞菌的基因组DNA抽提 | 第23页 |
| 2.1.5 沼泽红假单胞菌的基因组DNA凝胶电泳检测 | 第23页 |
| 2.1.6 甲氰菊酯降解酶基因的克隆 | 第23-27页 |
| 2.1.7 序列分析 | 第27页 |
| 2.2 结果分析 | 第27-30页 |
| 2.2.1 沼泽红假单胞菌基因组DNA的凝胶电泳检测 | 第27-28页 |
| 2.2.2 降解基因的梯度PCR扩增 | 第28页 |
| 2.2.3 目的片段的纯化回收 | 第28-29页 |
| 2.2.4 序列分析 | 第29-30页 |
| 2.3 结论 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 原核表达载体的构建 | 第32-37页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-34页 |
| 3.1.1 主要培养基和试剂 | 第32页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第32页 |
| 3.1.3 质粒提取 | 第32-33页 |
| 3.1.4 表达载体和目的片段双酶切 | 第33-34页 |
| 3.1.5 质粒重组 | 第34页 |
| 3.2 结果与分析 | 第34-36页 |
| 3.2.1 原核表达载体的构建 | 第34-36页 |
| 3.3 结论 | 第36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 降解蛋白的表达纯化 | 第37-46页 |
| 4.1 材料和方法 | 第37-42页 |
| 4.1.1 主要培养基和试剂 | 第37页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第37页 |
| 4.1.3 蛋白质诱导表达及条件优化 | 第37页 |
| 4.1.4 SDS-PAGE凝胶检测 | 第37-39页 |
| 4.1.5 细胞超声波破碎 | 第39页 |
| 4.1.6 蛋白的纯化 | 第39页 |
| 4.1.7 Western blot验证 | 第39-40页 |
| 4.1.8 蛋白质浓缩 | 第40-41页 |
| 4.1.9 蛋白质浓度测定 | 第41-42页 |
| 4.2 结果分析 | 第42-45页 |
| 4.2.1 目的蛋白的诱导 | 第42页 |
| 4.2.2 表达条件的优化 | 第42-43页 |
| 4.2.3 蛋白质纯化 | 第43页 |
| 4.2.4 Western blot验证 | 第43-44页 |
| 4.2.5 蛋白质浓度测定 | 第44-45页 |
| 4.3 结论 | 第45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-46页 |
| 第五章 降解特性研究 | 第46-57页 |
| 5.1 材料和方法 | 第46-48页 |
| 5.1.1 主要试剂和培养基 | 第46页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第46页 |
| 5.1.3 降解特性分析 | 第46-47页 |
| 5.1.4 样品前处理 | 第47-48页 |
| 5.1.5 气相色谱分析 | 第48页 |
| 5.2 结果分析 | 第48-56页 |
| 5.2.1 标准曲线制备 | 第48-50页 |
| 5.2.2 降解特性分析 | 第50-56页 |
| 5.3 结论 | 第56页 |
| 5.4 讨论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 附录1 常用英文缩写的中文全称 | 第65-66页 |
| 附录2 常用培养基和缓冲液配方 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |