| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 中英文缩略表 | 第9-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-26页 |
| 1. 兔病毒性出血症研究进展 | 第16-22页 |
| 1.1 病原学 | 第16-17页 |
| 1.2 诊断方法 | 第17-20页 |
| 1.2.1 血凝和血凝抑制试验和琼脂扩散试验 | 第17页 |
| 1.2.2 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第17-18页 |
| 1.2.3 胶体金免疫层析法 | 第18页 |
| 1.2.4 RT-PCR | 第18-19页 |
| 1.2.5 FQ-PCR | 第19页 |
| 1.2.6 RT-LAMP | 第19-20页 |
| 1.3 RHDV疫苗 | 第20-22页 |
| 1.3.1 组织灭活疫苗 | 第20页 |
| 1.3.2 重组蛋白疫苗 | 第20-21页 |
| 1.3.3 病毒载体疫苗 | 第21页 |
| 1.3.4 核酸疫苗 | 第21-22页 |
| 2. 实时荧光定量PCR研究进展 | 第22-24页 |
| 2.1 染料法 | 第22-23页 |
| 2.2 探针法 | 第23-24页 |
| 3. 动物感染试验 | 第24-25页 |
| 4. 研究背景与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 RHDV Taq-Man实时荧光定量RT-PCR方法的建立 | 第26-46页 |
| 1. 试验材料 | 第26-27页 |
| 1.1 病料、菌种和毒株 | 第26页 |
| 1.2 试验试剂 | 第26-27页 |
| 1.3 其他试剂的配制 | 第27页 |
| 1.4 样品检测 | 第27页 |
| 1.5 仪器与设备 | 第27页 |
| 2. 试验方法 | 第27-34页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.2 病毒RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.3 Taq-Man实时荧光定量RT-PCR标准品的制备 | 第29-30页 |
| 2.3.1 反转录 | 第29页 |
| 2.3.2 PCR扩增 | 第29页 |
| 2.3.3 目的片段胶纯化回收 | 第29-30页 |
| 2.3.4 连接 | 第30页 |
| 2.3.5 转化 | 第30页 |
| 2.3.6 重组质粒PCR鉴定 | 第30页 |
| 2.4 Taq-Man实时荧光定量RT-PCR标准曲线的绘制 | 第30-32页 |
| 2.4.1 Taq-Man实时荧光定量RT-PCR引物的验证 | 第30-31页 |
| 2.4.2 Taq-Man实时荧光定量RT-PCR标准品的制备 | 第31页 |
| 2.4.3 Taq-Man实时荧光定量RT-PCR反应条件的优化 | 第31-32页 |
| 2.4.4 标准曲线的绘制 | 第32页 |
| 2.5 重复性试验 | 第32页 |
| 2.6 敏感性试验 | 第32页 |
| 2.7 特异性试验 | 第32-33页 |
| 2.7.1 RHDV2模板的制备 | 第33页 |
| 2.7.2 特异性试验 | 第33页 |
| 2.8 临床检测 | 第33-34页 |
| 3. 试验结果与分析 | 第34-44页 |
| 3.1 Taq-Man荧光定量RT-PCR标准品制备 | 第34-36页 |
| 3.1.1 RHDV的PCR扩增 | 第34页 |
| 3.1.2 重组质粒PCR鉴定结果 | 第34-35页 |
| 3.1.3 测序结果 | 第35-36页 |
| 3.2 Taq-Man荧光定量RT-PCR引物检测 | 第36-37页 |
| 3.3 Taq-Man实时荧光定量RT-PCR程序优化 | 第37-40页 |
| 3.3.1 退火温度优化 | 第37页 |
| 3.3.2 引物浓度优化 | 第37-38页 |
| 3.3.3 探针浓度优化 | 第38-39页 |
| 3.3.4 反应体系确定 | 第39页 |
| 3.3.5 荧光定量RT-PCR标准曲线 | 第39-40页 |
| 3.4 重复性实验 | 第40-41页 |
| 3.5 敏感性试验 | 第41-42页 |
| 3.6 特异性试验 | 第42-43页 |
| 3.6.1 搭桥PCR试验结果 | 第42页 |
| 3.6.2 重组RHDV2质粒PCR鉴定结果 | 第42-43页 |
| 3.6.3 特异性试验 | 第43页 |
| 3.7 临床样品检测 | 第43-44页 |
| 4. 分析与讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 兔出血症病毒的家兔和乳鼠感染检测 | 第46-62页 |
| 1. 试验材料 | 第46-48页 |
| 1.1 试验动物和毒株 | 第46页 |
| 1.2 试验试剂 | 第46页 |
| 1.3 其他试剂配制 | 第46-47页 |
| 1.4 仪器与设备 | 第47-48页 |
| 2. 试验方法 | 第48-51页 |
| 2.1 家兔感染RHDV | 第48-50页 |
| 2.1.1 RHD病毒液无菌检测 | 第48页 |
| 2.1.2 人工感染RHDV | 第48页 |
| 2.1.3 血液采集 | 第48页 |
| 2.1.4 病毒RNA的提取与反转录 | 第48页 |
| 2.1.5 病理学观察 | 第48-49页 |
| 2.1.6 Taq-Man实时荧光定量RT-PCR检测 | 第49-50页 |
| 2.2 乳鼠感染RHDV | 第50页 |
| 2.2.1 RHD病毒液无菌检测 | 第50页 |
| 2.2.2 人工感染RHDV | 第50页 |
| 2.2.3 病毒RNA的提取与反转录 | 第50页 |
| 2.2.4 Taq-Man实时荧光定量RT-PCR检测 | 第50页 |
| 2.3 乳鼠的主要脏器原代培养细胞感染RHDV | 第50-51页 |
| 2.3.1 乳鼠主要脏器原代细胞的培养 | 第50-51页 |
| 2.3.2 细胞形态观察 | 第51页 |
| 2.3.3 接毒 | 第51页 |
| 2.3.4 Taq-Man实时荧光定量RT-PCR的检测 | 第51页 |
| 3. 试验结果 | 第51-60页 |
| 3.1 家兔感染RHDV结果 | 第51-56页 |
| 3.1.1 攻毒结果 | 第51-53页 |
| 3.1.2 病理切片观察 | 第53-54页 |
| 3.1.3 血液检测结果 | 第54-55页 |
| 3.1.4 Taq-Man实时荧光定量RT-PCR检测结果 | 第55-56页 |
| 3.2 乳鼠感染RHDV结果 | 第56-57页 |
| 3.2.1 攻毒结果 | 第56页 |
| 3.2.2 Taq-Man实时荧光定量RT-PCR检测结果 | 第56-57页 |
| 3.3 乳鼠脏器组织原代培养细胞感染RHDV检测结果 | 第57-60页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第57-59页 |
| 3.3.2 细胞接毒 | 第59页 |
| 3.3.3 荧光定量RT-PCR检测结果 | 第59-60页 |
| 4. 分析与讨论 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介及在校期间发表论文 | 第72页 |
