| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 文献综述 | 第12-26页 |
| 1.1 PPR(Pentatricopeptide repeats)基因家族的研究进展 | 第12页 |
| 1.2 植物启动子研究进展 | 第12-21页 |
| 1.2.1 启动子的概念 | 第12-13页 |
| 1.2.2 启动子的结构 | 第13-15页 |
| 1.2.3 启动子的分类 | 第15-20页 |
| 1.2.4 组织特异性启动子的应用 | 第20-21页 |
| 1.3 启动子的克隆方法 | 第21-23页 |
| 1.3.1 利用PCR技术克隆启动子 | 第21-22页 |
| 1.3.2 利用启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第22页 |
| 1.3.3 利用启动子捕获方法分离和鉴定启动子 | 第22-23页 |
| 1.4 启动子的分析方法 | 第23-25页 |
| 1.4.1 生物信息学分析 | 第23页 |
| 1.4.2 瞬时表达 | 第23-24页 |
| 1.4.3 稳定转化表达 | 第24页 |
| 1.4.4 突变分析法 | 第24页 |
| 1.4.5 凝胶电泳迁移技术 | 第24页 |
| 1.4.6 足迹法 | 第24-25页 |
| 1.4.7 酵母单杂交技术 | 第25页 |
| 1.5 外源基因过量表达的危害 | 第25页 |
| 1.6 本实验的研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-43页 |
| 2.1 技术路线 | 第26-27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.2.2 菌株和载体 | 第27页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第27页 |
| 2.2.4 溶液 | 第27-29页 |
| 2.2.5 引物 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-43页 |
| 2.3.1 荧光定量PCR | 第29-31页 |
| 2.3.2 提取玉米基因组DNA | 第31-32页 |
| 2.3.3 启动子序列分析 | 第32页 |
| 2.3.4 引物设计 | 第32-33页 |
| 2.3.5 PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.3.6 构建pMD19-T-pPPR1830克隆载体 | 第34-35页 |
| 2.3.7 检测重组克隆载体 | 第35页 |
| 2.3.8 构建植物表达载体 | 第35-37页 |
| 2.3.9 植物表达载体转化农杆菌 | 第37-38页 |
| 2.3.10 瞬时表达 | 第38页 |
| 2.3.11 GUS组织化学染色 | 第38-39页 |
| 2.3.12 农杆菌介导烟草的遗传转化及转基因烟草阳性鉴定 | 第39-40页 |
| 2.3.13 GUS组织化学染色 | 第40页 |
| 2.3.14 GUS酶活性定量检测 | 第40-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-58页 |
| 3.1 PPR_(GRMZM2G129783)基因的器官特异性表达 | 第43-45页 |
| 3.1.1 内参Actin基因和PPR_(GRMZM2G129783)基因引物特异性 | 第43-44页 |
| 3.1.2 内参Actin基因和PPR_(GRMZM2G129783)基因的标准曲线 | 第44页 |
| 3.1.3 PPR_(GRMZM2G129783)基因在玉米不同器官中的表达量 | 第44-45页 |
| 3.2 PPR_(GRMZM2G129783)基因上游的顺式作用元件 | 第45-48页 |
| 3.3 PPR_(GRMZM2G129783)基因启动子全长序列 | 第48-49页 |
| 3.4 5 ’-端缺失启动子片段 | 第49页 |
| 3.5 不同长度启动子表达载体 | 第49-50页 |
| 3.6 不同长度启动子表达载体转化农杆菌菌株 | 第50-51页 |
| 3.7 不同长度启动子表达载体在烟草叶片中瞬时表达 | 第51-53页 |
| 3.8 转基因烟草的获得 | 第53-55页 |
| 3.9 不同长度启动子在转基因烟草中的启动活性 | 第55-58页 |
| 4 讨论 | 第58-63页 |
| 4.1 启动子的器官特异性受转基因受体的影响 | 第58-60页 |
| 4.2 不同生长发育阶段启动子的活性发生改变 | 第60-61页 |
| 4.3 pPPR1830启动子的器官特异性 | 第61页 |
| 4.4 有待研究的问题 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
