| 中文摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-17页 |
| 1 前言 | 第17-40页 |
| ·禽网状内皮组织增殖病病毒研究进展 | 第17-28页 |
| ·REV病原学 | 第17-21页 |
| ·病毒基因组结构及功能介绍 | 第17-20页 |
| ·REV的复制 | 第20-21页 |
| ·REV的分类 | 第21-22页 |
| ·REV的致病性 | 第22-24页 |
| ·REV的流行病学 | 第24-25页 |
| ·宿主 | 第24页 |
| ·病毒的传播 | 第24-25页 |
| ·REV诊断 | 第25-28页 |
| ·病毒分离 | 第26页 |
| ·血清学检测 | 第26-27页 |
| ·鉴别诊断 | 第27-28页 |
| ·预防控制 | 第28页 |
| ·免疫接种 | 第28页 |
| ·治疗措施 | 第28页 |
| ·防控措施 | 第28页 |
| ·病毒的准种及其演变 | 第28-33页 |
| ·准种的基本特性 | 第29-30页 |
| ·准种的作用与意义 | 第30页 |
| ·准种的研究方法 | 第30-31页 |
| ·限制性片段长度多态性分析 | 第30页 |
| ·单链构像多态性分析 | 第30-31页 |
| ·异源双链泳动分析法 | 第31页 |
| ·毛细管电泳法 | 第31页 |
| ·PCR-质粒克隆-序列比对分析 | 第31页 |
| ·病毒准种的产生及其在不同选择压力下的演变 | 第31-33页 |
| ·REV对HIV研究的模式作用 | 第33页 |
| ·核酸疫苗与分子免疫佐剂 | 第33-40页 |
| ·核酸疫苗研究进展情况 | 第33-35页 |
| ·定义 | 第33页 |
| ·核酸疫苗构成 | 第33页 |
| ·核酸疫苗分类 | 第33-34页 |
| ·核酸疫苗的作用机制 | 第34-35页 |
| ·核酸疫苗接种方法和途径 | 第35页 |
| ·接种剂量 | 第35页 |
| ·分子佐剂补体C3D研究进展 | 第35-40页 |
| ·C3D的分子佐剂作用 | 第35-37页 |
| ·C3D对体液免疫应答的影响 | 第37-38页 |
| ·C3D对细胞免疫应答的影响 | 第38页 |
| ·C3D对细胞因子表达类型的影响 | 第38页 |
| ·对抗原特异性体液和细胞免疫的负向调节作用 | 第38-39页 |
| ·C3D分子间的直接串联 | 第39页 |
| ·小鼠品系对C3D免疫作用的影响 | 第39-40页 |
| ·不同动物C3D的研究 | 第40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-69页 |
| ·试验材料 | 第40-45页 |
| ·鸡胚、细胞与毒株 | 第40页 |
| ·单克隆抗体与标记抗体 | 第40页 |
| ·细胞培养试剂及耗材 | 第40页 |
| ·检测试剂盒 | 第40-41页 |
| ·分子生物试剂 | 第41页 |
| ·常规试剂 | 第41页 |
| ·常规溶液的配制 | 第41-43页 |
| ·原核表达载体与真核表达载体 | 第43-44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44-45页 |
| ·试验方法 | 第45-69页 |
| ·我国部分种鸡场血清样品的采集与保存 | 第45-46页 |
| ·我国部分种鸡场REV抗体的ELISA检测 | 第46页 |
| ·血清样品的IFA鉴定 | 第46-48页 |
| ·鸡胚成纤维细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·REV感染阳性细胞的制备与鉴定 | 第47页 |
| ·待检血清样品的IFA鉴定 | 第47-48页 |
| ·某蛋鸡群REV感染样品采集与病毒的分离鉴定 | 第48-49页 |
| ·待检血清学样品的ELISA检测 | 第49-50页 |
| ·分离毒株ENV基因的克隆与序列分析 | 第50-54页 |
| ·感染细胞DNA的提取 | 第50页 |
| ·引物的设计与合成 | 第50-51页 |
| ·ENV基因的PCR扩增 | 第51页 |
| ·PCR产物的电泳鉴定 | 第51页 |
| ·PCR扩增产物的回收与纯化 | 第51-52页 |
| ·PCR产物与T载体的连接 | 第52页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第52-53页 |
| ·连接产物的转化 | 第53页 |
| ·重组菌的筛选和鉴定 | 第53页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·不同分离株的准种比较及其分子演化 | 第54页 |
| ·REV的ENV片段与不同C3D组合原核表达载体构建与表达 | 第54-64页 |
| ·细胞的制备与病毒的增殖 | 第54-55页 |
| ·REV ENV基因的克隆 | 第55-57页 |
| ·鸡C3D基因的克隆 | 第57-59页 |
| ·构建不同重复C3D与ENV-1050融合PCR产物 | 第59-61页 |
| ·构建含HIS标签的PET-ENV-1050, PET-ENV10502C3D, PET-ENV10503C3D和PET-ENV10504C3D重组表达载体 | 第61页 |
| ·诱导PET-ENV-1050, PET-ENV10502C3D, PET-ENV10503C3D和PET-ENV10504C3D表达 | 第61页 |
| ·蛋白质电泳 | 第61-63页 |
| ·表达产物的WESTERN-BLOT检测 | 第63页 |
| ·PET-ENV-1050, PET-ENV10502C3D和PET-ENV10503C3D的纯化 | 第63-64页 |
| ·REV的ENV片段与不同C3D组合真核表达载体构建与表达 | 第64-68页 |
| ·将TPA标签克隆到PCDNA-FLAG载体中 | 第64-65页 |
| ·ENV与不同重复C3D串联真核表达载体的构建 | 第65-67页 |
| ·ENV与不同重复C3D串联真核表达载体的表达 | 第67-68页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第68页 |
| ·重组蛋白的WESTERN-BLOT鉴定 | 第68页 |
| ·重组蛋白的免疫效果初探 | 第68-69页 |
| 3 试验结果 | 第69-90页 |
| ·我国部分种鸡群REV感染的血清学调查 | 第69-77页 |
| ·曾祖代种鸡场中REV抗体阳性率统计 | 第69页 |
| ·祖代种鸡场中REV抗体阳性率统计 | 第69-70页 |
| ·父母代种鸡场中REV抗体阳性率统计 | 第70-71页 |
| ·地方品系种鸡中REV抗体阳性率统计 | 第71-73页 |
| ·ELISA和IFA鉴定结果的对比 | 第73页 |
| ·曾祖代中不同品系之间感染率比较分析 | 第73-74页 |
| ·曾祖代中不同品系之间感染率比较分析 | 第74-75页 |
| ·地方品系开产前后感染率比较分析 | 第75页 |
| ·ELISA 和 IFA 鉴定结果的对比 | 第75-77页 |
| ·某种鸡群REV准种多样性分析 | 第77-79页 |
| ·病毒的分离鉴定 | 第77页 |
| ·不同分离株的准种分析与比较 | 第77页 |
| ·不同分离株优势变种的分子演化 | 第77-79页 |
| ·不同C3D片段组合与ENV基因的串联原核表达 | 第79-86页 |
| ·病毒的鉴定 | 第79页 |
| ·ENV基因的克隆 | 第79-80页 |
| ·鸡C3D基因的克隆 | 第80-82页 |
| ·不同重复C3D序列构建 | 第82-83页 |
| ·不同重复C3D序列与ENV-1050 PCR产物融合 | 第83页 |
| ·构建PET-ENV-1050, PET-ENV10502C3D, PET-ENV10503C3D和PET-ENV10504C3D重组表达载体 | 第83-84页 |
| ·诱导PET-ENV-1050, PET-ENV10502C3D, PET-ENV10503C3D和PET-ENV10504C3D表达 | 第84-85页 |
| ·WESTERN-BLOT检测 | 第85-86页 |
| ·PET-ENV-1050, PET-ENV10502C3D, PET-ENV10503C3D纯化 | 第86页 |
| ·不同C3D片段组合与ENV基因的串联真核表达 | 第86-88页 |
| ·将TPA标签克隆到PCDNA-FLAG载体中 | 第86页 |
| ·不同C3D片段组合与ENV基因的串联真核表达载体构建 | 第86-88页 |
| ·WESTERN-BLOT鉴定真核表达情况 | 第88页 |
| ·重组蛋白的免疫效果初探 | 第88-90页 |
| 4 讨论 | 第90-96页 |
| ·我国不同鸡群中REV的流行状况分析 | 第90-91页 |
| ·IFA和ELISA在REV血清学检测中的比较 | 第91-92页 |
| ·同一鸡群不同个体中REV准种比较 | 第92-93页 |
| ·REV不同重复C3D与ENV-1050融合蛋白的表达与免疫效果初探 | 第93-96页 |
| 5 本文结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第111页 |
