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拟南芥CyclinH蛋白的原核表达纯化及特征性分析

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-8页
第一章 文献综述第8-18页
   ·细胞周期蛋白第8-11页
     ·细胞周期蛋白的基本概况第8-9页
     ·细胞周期蛋白的结构特点第9页
     ·细胞周期蛋白与细胞周期调控的关系第9-11页
   ·细胞周期蛋白H的研究进展第11-14页
     ·拟南芥CyclinH的研究发现第12-13页
     ·其他物种Cyclin等的研究进展第13页
     ·CyclinH的其他功能第13-14页
   ·蛋白质三维结构测定研究方法第14-15页
   ·本研究的目的和意义第15-17页
   ·技术路线第17-18页
第二章 拟南芥CyclinH基因的克隆和分析第18-34页
   ·材料及方法第18-19页
     ·实验材料第18页
     ·质粒与菌株第18页
     ·试剂与仪器设备第18-19页
     ·培养基以及各种相关试剂配制第19页
     ·引物设计与合成第19页
   ·方法第19-25页
     ·拟南芥总RNA的提取第19-21页
       ·植物材料的处理第19页
       ·器皿的处理第19-20页
       ·试剂溶液的处理第20页
       ·植物总RNA的提取、质量鉴定和cDNA的合成第20-21页
     ·AtCyclinH的原核表达载体构建第21-25页
       ·AtCyclinH基因的克隆第21页
       ·基因片段的分离与回收第21-22页
       ·回收产物与pMD19- T simple载体的连接第22页
       ·大肠杆菌DH5α、DE3、Rosetta感受态细胞制备第22-23页
       ·重组质粒热激法转化DH5α 感受态细胞第23页
       ·阳性克隆的筛选及测序鉴定第23页
       ·重组质粒DNA与载体质粒DNA的提取第23-24页
       ·重组质粒DNA与载体质粒DNA的双酶切与连接第24-25页
     ·AtCyclinH基因的序列分析第25页
   ·结果与分析第25-34页
     ·拟南芥总RNA提取分析第25-26页
     ·AtCyclinH基因各片段载体的构建第26-29页
       ·AtCyclin H基因各片段的克隆第26-27页
       ·AtCyclin H基因各片段和载体的酶切连接第27页
       ·AtCyclin H基因各片段载体的菌检和验证第27-29页
     ·AtCyclinH基因的生物信息学序列分析第29-34页
       ·AtCyclin H基因序列分析第29-31页
       ·AtCyclinH与人类和水稻CyclinH的氨基酸序列比对第31-32页
       ·AtCyclinH三级结构预测第32-34页
第三章 AtCyclinH蛋白的原核表达纯化、鉴定与晶体初筛第34-46页
   ·材料与方法第34-39页
     ·材料第34页
     ·试剂与仪器设备第34页
     ·培养基以及各种相关试剂配制第34-35页
     ·方法第35-39页
       ·亲和层析的原理、蛋白诱导表达原理及SDS-PAGE胶配置第35-37页
       ·重组AtCyclinH蛋白的可溶性条件筛选第37页
       ·重组AtCyclinH蛋白的小量纯化条件摸索第37-38页
       ·重组AtCyclinH蛋白的大量纯化第38页
       ·Western blot鉴定AtCyclin H蛋白第38-39页
       ·AtCyclinH重组蛋白的质谱实验鉴定第39页
       ·AtCyclinH蛋白晶体生长条件初筛第39页
   ·结果与分析第39-46页
     ·AtCyclinH的原核表达与纯化第39-44页
       ·AtCyclinH重组蛋白的小量表达检测第39-42页
       ·AtCyclinH蛋白的分子筛层析第42-44页
     ·Western检测AtCyclinH蛋白第44-45页
     ·AtCyclinH蛋白的多肽指纹图谱验证第45页
     ·初步晶体筛选第45-46页
第四章 拟南芥CyclinH蛋白生物特征性的研究第46-60页
   ·材料第46页
     ·材料第46页
     ·仪器设备第46页
   ·方法第46-49页
     ·AtCyclinH重组蛋白的戊二醛交联实验第46页
     ·AtCyclinH重组蛋白的圆二色谱实验第46-47页
     ·AtCyclinH重组蛋白的稳定性实验第47-48页
       ·常温下稳定性实验第47页
       ·热稳定性试验第47-48页
     ·非变性Native胶检测第48页
     ·胰凝乳蛋白酶酶切实验第48-49页
   ·结果与分析第49-57页
     ·戊二醛交联实验结果分析第49页
     ·圆二色谱(Circular Dichroism ,CD)结果的拟合和分析第49-50页
     ·蛋白稳定性实验的分析第50-54页
       ·蛋白常温下的稳定性第50-51页
       ·蛋白的热稳定性分析第51-54页
     ·Native胶检测蛋白的状态以及其和金属离子结合的情况第54-55页
     ·糜蛋白酶(Chymotrypsin)酶切实验分析第55-57页
   ·讨论第57-60页
第五章 结论和展望第60-62页
   ·结论第60页
   ·展望第60-62页
参考文献第62-66页
附录第66-67页
个人简介第67-68页
在校期间发表论文情况第68-69页
致谢第69页

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