| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-29页 |
| ·糖基化概述 | 第15-20页 |
| ·糖基化分类 | 第15-16页 |
| ·N-糖基化序列 | 第16-17页 |
| ·N-糖基化途径 | 第17-20页 |
| ·N-糖基化的研究进展 | 第20-25页 |
| ·N-糖基化对蛋白质稳定性的影响 | 第20-21页 |
| ·N-糖基化对蛋白质分泌的影响 | 第21-22页 |
| ·N-糖基化对蛋白质活力的影响 | 第22-25页 |
| ·N-糖基化对酶底物之间的亲和力影响 | 第25页 |
| ·纤维素酶N-糖基化 | 第25-27页 |
| ·研究目的及内容 | 第27-29页 |
| ·研究目的 | 第27页 |
| ·研究内容 | 第27-29页 |
| 第2章 N-糖基化对匍枝根霉内切葡聚糖酶Ⅱ催化特性的影响 | 第29-52页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·菌株与质粒 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·试剂与仪器 | 第29-30页 |
| ·试验方法 | 第30-36页 |
| ·匍枝根霉内切葡聚糖酶Ⅱ(EG Ⅱ)的N-糖基化位点预测 | 第30页 |
| ·菌种活化及重组质粒提取 | 第30-31页 |
| ·目的基因的获得及其定点突变 | 第31-33页 |
| ·目的基因的纯化及测序 | 第33页 |
| ·EG Ⅱ及其突变体的生物信息学分析 | 第33页 |
| ·表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·转化子筛选及验证 | 第34-35页 |
| ·表达载体的线性化 | 第35页 |
| ·毕赤酵母GS115感受态的制备(现做现用) | 第35页 |
| ·线性化质粒电转化至毕赤酵母感受态细胞 | 第35页 |
| ·毕赤酵母重组子的筛选及验证 | 第35-36页 |
| ·重组菌株的诱导表达 | 第36页 |
| ·粗酶液发酵酶活测定 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-50页 |
| ·匍枝根霉内切葡聚糖酶ⅡN-糖基化位点的预测 | 第36-37页 |
| ·eg Ⅱ基因的获得及其定点突变 | 第37-39页 |
| ·EG Ⅱ及其突变体结构分析 | 第39-45页 |
| ·表达载体的构建 | 第45-50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第3章 重组蛋白的分离纯化及其酶学性质研究 | 第52-70页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·菌株 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52页 |
| ·试剂与仪器 | 第52-53页 |
| ·酶活测定方法 | 第53页 |
| ·试验方法 | 第53-56页 |
| ·10L发酵罐放大实验 | 第53-54页 |
| ·蛋白质标准曲线的绘制 | 第54页 |
| ·三种重组蛋白的制备 | 第54-55页 |
| ·三种重组蛋白基本酶学性质研究 | 第55-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-68页 |
| ·10L发酵罐放大实验 | 第56-58页 |
| ·不同菌体起始湿重对重组毕赤酵母表达的影响 | 第58-60页 |
| ·不同诱导温度对重组毕赤酵母表达的影响 | 第60-62页 |
| ·蛋白质标准曲线的绘制 | 第62页 |
| ·三种重组蛋白的制备 | 第62-64页 |
| ·三种重组蛋白基本酶学性质研究 | 第64-68页 |
| ·小结 | 第68-70页 |
| 第4章 结论与展望 | 第70-73页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |