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天仙子氮甲基腐胺转移酶(PMT)基因启动子的克隆及功能分析

摘要第1-9页
Abstract第9-12页
第1章 文献综述第12-21页
   ·天仙子的研究概况第12页
   ·高等植物启动子的研究进展第12-16页
     ·高等植物启动子的结构和功能第12-13页
     ·高等植物启动子的研究方法第13-16页
   ·高等植物启动子的类型及研究进展第16-19页
     ·组成型启动子第16-17页
     ·组织特异性启动子第17-18页
     ·诱导型启动子第18-19页
     ·双向启动子,串联启动子和可变启动子第19页
   ·茉莉酸类物质(JAs)诱导次生代谢的相关研究及JA响应启动子元件第19-21页
第2章 绪论第21-22页
   ·研究目的和意义第21页
   ·技术路线第21-22页
第3章 材料与方法第22-43页
   ·实验材料、试剂与仪器第22-27页
     ·植物材料第22页
     ·菌株和质粒第22页
     ·仪器和设备第22页
     ·试剂盒及试剂购买第22-23页
     ·常规试剂和培养基的配制第23-27页
   ·常规方法和操作步骤第27-34页
     ·RNA的提取与检测第27页
     ·反转录反应体系第27-28页
     ·实时荧光定量PCR方法第28-29页
     ·CTAB法抽提天仙子基因组DNA第29页
     ·产物的琼脂糖凝胶电泳第29页
     ·目的条带的回收第29页
     ·TA克隆第29-30页
     ·大肠杆菌DH5α 感受态细胞的制备(CaCl2法)第30页
     ·大肠杆菌感受态细胞的转化第30页
     ·菌落PCR反应体系第30-31页
     ·菌落PCR反应条件第31页
     ·质粒的提取第31页
     ·酶切验证第31页
     ·限制性内切酶酶切体系及连接体系第31-32页
     ·农杆菌感受态细胞的制备第32-33页
     ·表达载体冻融法转化农杆菌第33页
     ·发根农杆菌介导的天仙子叶盘转化第33-34页
     ·拟南芥的遗传转化第34页
     ·潮霉素筛选第34页
   ·HnPMT启动子克隆第34-37页
     ·hiTALL-PCR法克隆HnPMT基因 5′上游未知序列第34-37页
   ·启动子缺失片段的克隆及表达载体的构建第37-38页
     ·构建启动子pGEM?-T Easy中间载体第38页
     ·启动子缺失片段表达载体的构建第38页
   ·pCAMBI A1391Z-HnPMT启动子驱动GUS基因在天仙子发根和拟南芥中的表达第38-39页
     ·pCAMBI A1391Z-HnPMT promoter载体的农杆菌转化第38-39页
     ·转基因发根的获得第39页
     ·转基因拟南芥的获得第39页
   ·报告基因表达情况分析第39-43页
     ·GUS报告基因的定性检测第39-40页
     ·GUS活性的组织化学分析第40页
     ·GUS报告基因的定量检测第40-43页
第4章 结果与分析第43-53页
   ·HnPMT启动子的克隆第43-44页
     ·利用hiTALL-PCR技术克隆HnPMT的 5'端未知序列第43-44页
   ·利用计算机在线工具对HnPMT启动子的功能进行预测第44-45页
   ·启动子pGEM?-T Easy中间载体的构建第45-46页
   ·pCAMBI A1391Z-HnPMT promoter表达载体的构建第46-47页
   ·pCAMBI A1391Z-HnPMT promoter转基因发根及转基因拟南芥的检测第47-49页
   ·HnPMT基因启动子组织表达模式第49-51页
     ·HnPMT基因启动子在拟南芥植株中的组织表达模式分析第49-50页
     ·HnPMT启动子天仙子发根的组织化学染色及石蜡切片分析第50-51页
   ·HnPMT基因启动子对MeJA诱导的响应第51-52页
   ·HnPMT启动子的定点突变第52-53页
第5章 讨论第53-55页
   ·HnPMT启动子作用的组织特异性第53-54页
   ·HnPMT启动子对MeJA诱导的响应第54-55页
第6章 结论第55-56页
参考文献第56-63页
附录第63-65页
 缩写词表第63-65页
致谢第65-66页
研究生期间发表论文、参与项目第66页

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