| 摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1. 引言 | 第10-19页 |
| ·干扰素概述 | 第10页 |
| ·干扰素的来源与种类 | 第10-11页 |
| ·干扰素α的结构及生物学特性 | 第11-12页 |
| ·干扰素在畜牧兽医上的应用 | 第12页 |
| ·基因工程干扰素的研究进展 | 第12-13页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达 | 第13-16页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第13-14页 |
| ·提高重组蛋白可溶性表达的方法 | 第14-16页 |
| ·内含肽介导的蛋白表达与纯化 | 第16-17页 |
| ·内含肽的结构组成 | 第16页 |
| ·内含肽的自我剪接机制 | 第16-17页 |
| ·内含肽的应用 | 第17页 |
| ·研究的目的与意义 | 第17-19页 |
| 2. 材料与方法 | 第19-36页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·质粒、宿主菌、病毒 | 第19页 |
| ·细胞、培养基、血清和胚 | 第19页 |
| ·酶和生化试剂 | 第19页 |
| ·软件和在线程序 | 第19页 |
| ·主要仪器和设备 | 第19-20页 |
| ·主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-36页 |
| ·分泌型表达载体的构建 | 第21-25页 |
| ·内含肽-融合标签型表达载体的构建 | 第25-30页 |
| ·内含肽-冷激表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·蛋白的表达 | 第32-33页 |
| ·GSNp 融合蛋白的纯化及定量 | 第33页 |
| ·GSNp 融合蛋白抗病毒活性鉴定 | 第33-36页 |
| 3. 结果与分析 | 第36-53页 |
| ·分泌型表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·GoIFN-α基因的 PCR 扩增 | 第36页 |
| ·pelB 基因的 PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·pelB-GoIFN-α融合基因的扩增 | 第37页 |
| ·分泌型表达载体 pET-22b-pelB-GoIFN-α 的构建 | 第37-38页 |
| ·内含肽-融合标签型表达载体的构建 | 第38-42页 |
| ·SDI 和 GoIFN-α基因的 PCR 扩增及串联 | 第38-40页 |
| ·SDI-GoIFN-α串联基因的 PCR 扩增 | 第40页 |
| ·SDI-GoIFN-α与多种表达载体的连接 | 第40-42页 |
| ·内含肽-冷激表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·SDI-GoIFN-α与融合标签 NusA 的连接 | 第42页 |
| ·pColdⅢ-NusA-SDI-GoIFN-α表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·蛋白的表达 | 第43-47页 |
| ·GoIFN-α基因在分泌型表达系统中的表达 | 第43-44页 |
| ·GoIFN-α基因在内含肽-融合标签型表达系统中的表达 | 第44-45页 |
| ·GoIFN-α基因在内含肽-冷激表达系统中的表达 | 第45-46页 |
| ·融合蛋白的 Western blot 鉴定 | 第46-47页 |
| ·GSNp 融合蛋白的非变性纯化 | 第47-48页 |
| ·GSNp 融合蛋白的抗病毒活性检测 | 第48-53页 |
| ·GSNp 融合蛋白在 CGBQ 细胞上的抗病毒活性 | 第48-50页 |
| ·GSNp 融合蛋白在 DEF 细胞上的抗病毒活性 | 第50-53页 |
| 4. 讨论 | 第53-58页 |
| ·研究重组 GoIFN-α在大肠杆菌中可溶性表达的意义 | 第53页 |
| ·可溶性表达系统的选择 | 第53-54页 |
| ·Ssp DnaB mini-intein 内含肽的融合 | 第54-55页 |
| ·蛋白的表达 | 第55-56页 |
| ·蛋白表达的问题 | 第55页 |
| ·诱导条件对蛋白可溶性表达的影响 | 第55-56页 |
| ·培养温度对蛋白可溶性表达的影响 | 第56页 |
| ·融合标签对可溶性表达的影响 | 第56页 |
| ·融合蛋白 GSNp 的抗病毒活性 | 第56-58页 |
| 5. 结论 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第66页 |
