| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 1 引言 | 第11-19页 |
| ·香蕉多酚氧化酶研究进展 | 第11-15页 |
| ·香蕉PPO的分离纯化 | 第11-12页 |
| ·香蕉PPO酶学特性 | 第12-14页 |
| ·香蕉PPO的属性 | 第12页 |
| ·温度、pH对香蕉PPO活性和稳定性的影响 | 第12-13页 |
| ·底物对香蕉PPO活性的影响 | 第13页 |
| ·香蕉PPO活性的变化规律 | 第13-14页 |
| ·香蕉PPO活性的控制 | 第14-15页 |
| ·物理方法控制香蕉PPO活性 | 第14页 |
| ·化学方法控制香蕉PPO活性 | 第14-15页 |
| ·香蕉PPO的抗病性及其应用 | 第15页 |
| ·香蕉PPO基因的研究 | 第15页 |
| ·电子克隆技术研究现状 | 第15-19页 |
| ·电子克隆的原理 | 第16页 |
| ·电子克隆的实施方案 | 第16-17页 |
| ·基于EST数据库的电子克隆 | 第16页 |
| ·基于基因组数据库的电子克隆 | 第16-17页 |
| ·原核表达研究进展 | 第17页 |
| ·本研究目的和意义 | 第17-18页 |
| ·本研究技术路线 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-36页 |
| ·实验材料与设备 | 第19-23页 |
| ·实验样品 | 第19页 |
| ·菌株和质粒 | 第19页 |
| ·主要仪器与设备 | 第19页 |
| ·试剂盒、工具酶及主要生化试剂 | 第19-20页 |
| ·常规培养基及溶液的配制 | 第20-23页 |
| ·实验方法 | 第23-36页 |
| ·香蕉果肉总RNA提取条件优化 | 第23-25页 |
| ·RNA常规提取方法 | 第23页 |
| ·RNA提取条件优化 | 第23-24页 |
| ·RNA完整性分析 | 第24页 |
| ·RNA纯度及含量检测 | 第24页 |
| ·RNA提取方法验证 | 第24页 |
| ·RT-PCR分析 | 第24-25页 |
| ·电子克隆香蕉PPO基因 | 第25页 |
| ·电子克隆基因的PCR扩增验证 | 第25-27页 |
| ·特异性引物设计与合成 | 第25页 |
| ·香蕉PPO基因PCR扩增 | 第25页 |
| ·PCR产物目的片段回收纯化 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·PCR产物与T载体的连接 | 第26页 |
| ·连接产物转化 | 第26-27页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第27页 |
| ·香蕉PPO基因测序 | 第27页 |
| ·香蕉PPO基因测序结果分析 | 第27页 |
| ·香蕉PPO的生物信息学分析 | 第27-28页 |
| ·香蕉PPO基因同源性分析及进化树图谱的构建 | 第27页 |
| ·香蕉PPO的亚细胞定位 | 第27页 |
| ·香蕉PPO信号肽预测和分析 | 第27页 |
| ·香蕉PPO的跨膜预测 | 第27-28页 |
| ·香蕉PPO结构域分析及功能预测 | 第28页 |
| ·香蕉PPO氨基酸理化性质分析 | 第28页 |
| ·香蕉PPO亲水性/疏水性分析 | 第28页 |
| ·蛋白质二级及三级结构的预测 | 第28页 |
| ·香蕉PPO原核表达载体构建 | 第28-32页 |
| ·带酶切位点PCR引物合成 | 第28页 |
| ·重组PPO基因克隆 | 第28-29页 |
| ·双酶切pMD19-T-PPO及载体 | 第29-30页 |
| ·酶切产物纯化 | 第30页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第30-31页 |
| ·连接产物转化 | 第31页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第31页 |
| ·双酶切验证 | 第31-32页 |
| ·阳性克隆测序比对分析 | 第32页 |
| ·香蕉PPO原核诱导表达 | 第32-36页 |
| ·宿主菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·重组质粒转化至宿主菌 | 第32-33页 |
| ·香蕉PPO在大肠杆菌中的诱导表达 | 第33页 |
| ·表达产物包涵体含量分析 | 第33-34页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| ·包涵体变性复性 | 第35页 |
| ·表达产物酶活性分析 | 第35页 |
| ·表达产物蛋白质含量分析 | 第35页 |
| ·包涵体纯化 | 第35页 |
| ·重组蛋白质质谱鉴定 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-74页 |
| ·香蕉果肉总RNA提取条件优化 | 第36-44页 |
| ·提取缓冲液对RNA提取质量和得率的影响 | 第36页 |
| ·缓冲液pH和离子浓度对RNA提取质量和得率的影响 | 第36-38页 |
| ·CaCl_2浓度、处理温度和处理时间对RNA提取质量和得率的影响 | 第38-40页 |
| ·LiCl沉淀时间对RNA提取质量和得率的影响 | 第40页 |
| ·异丙醇简化RNA沉淀 | 第40-41页 |
| ·香蕉果肉总RNA优化提取方法验证 | 第41-44页 |
| ·电子克隆香蕉PPO基因 | 第44-50页 |
| ·电子克隆香蕉PPO基因验证 | 第50-56页 |
| ·香蕉PPO基因的PCR扩增 | 第50页 |
| ·香蕉PPO基因的PCR产物克隆与鉴定 | 第50-52页 |
| ·香蕉PPO基因的PCR产物测序结果分析 | 第52-56页 |
| ·香蕉PPO阅读框架分析 | 第52-55页 |
| ·BXPPO1与NBPPO2序列比对 | 第55-56页 |
| ·香蕉PPO基因的生物信息学分析 | 第56-61页 |
| ·香蕉PPO基因同源性分析及进化树图谱的构建 | 第56-57页 |
| ·香蕉PPO的亚细胞定位 | 第57页 |
| ·香蕉PPO信号肽和转运肽的预测和分析 | 第57-58页 |
| ·香蕉PPO的跨膜螺旋预测 | 第58页 |
| ·香蕉PPO结构域分析及功能预测 | 第58-59页 |
| ·香蕉PPO氨基酸理化性质分析 | 第59-60页 |
| ·香蕉PPO亲水性/疏水性分析 | 第60页 |
| ·蛋白质二级及三级结构的预测 | 第60-61页 |
| ·香蕉PPO原核表达载体构建 | 第61-66页 |
| ·带酶切位点PCR引物合成 | 第61-62页 |
| ·重组PPO基因克隆 | 第62-63页 |
| ·表达载体构建 | 第63-66页 |
| ·阳性克隆测序及比对分析 | 第66页 |
| ·香蕉PPO原核诱导表达 | 第66-74页 |
| ·不同IPTG浓度对蛋白表达的影响 | 第66-68页 |
| ·不同诱导时间对蛋白表达的影响 | 第68-70页 |
| ·不同Cu~(2+)浓度对蛋白表达的影响 | 第70页 |
| ·不同培养基对蛋白表达的影响 | 第70-71页 |
| ·表达产物包涵体含量分析 | 第71-72页 |
| ·包涵体变性复性 | 第72页 |
| ·包涵体纯化 | 第72页 |
| ·蛋白质测序验证 | 第72-74页 |
| 4 讨论 | 第74-77页 |
| ·香蕉果肉总RNA提取的优化 | 第74页 |
| ·电子克隆香蕉PPO基因 | 第74-75页 |
| ·香蕉PPO的原核诱导表达 | 第75-77页 |
| 5 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-87页 |
| 缩略词表 | 第87-88页 |
| 附录 | 第88-92页 |
| 致谢 | 第92页 |