| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| ·烟草病毒病 | 第11-14页 |
| ·烟草病毒病及病原 | 第11页 |
| ·烟草病毒的传播途径与介体 | 第11-12页 |
| ·烟草病毒病在我国现状 | 第12页 |
| ·烟草病毒病的防治措施 | 第12-14页 |
| ·与烟蚜传毒相关的蛋白 | 第14-15页 |
| ·RNAi概述 | 第15-22页 |
| ·RNAi的定义 | 第15页 |
| ·RNAi的发现与研究 | 第15-16页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第16-17页 |
| ·转录后基因沉默 | 第16页 |
| ·转录水平基因沉默 | 第16-17页 |
| ·翻译水平上基因沉默 | 第17页 |
| ·RNAi作用过程中的关键因子及特点 | 第17-18页 |
| ·RNAi作用过程中的关键因子 | 第17-18页 |
| ·RNAi的特点 | 第18页 |
| ·RNAi技术在控制农业昆虫中的应用 | 第18-22页 |
| ·昆虫RNAi的导入方式 | 第18-19页 |
| ·影响RNAi技术的其他因素 | 第19-20页 |
| ·RNAi技术控制害虫效果 | 第20-22页 |
| ·昆虫RNAi信号系统传递 | 第22页 |
| ·研究目的与内容 | 第22-25页 |
| 第二章 湖南地区烟草病毒病检测与分析 | 第25-31页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·样品采集 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器与耗材 | 第25页 |
| ·试验方法 | 第25-28页 |
| ·引物的选择 | 第25-26页 |
| ·烟草总RNA的提取 | 第26页 |
| ·cDNA合成 | 第26-27页 |
| ·常规PCR反应 | 第27-28页 |
| ·PCR产物凝胶电泳检测 | 第28页 |
| ·烟草病毒病检测结果与分析 | 第28-31页 |
| ·烟草病毒病症状 | 第28页 |
| ·PCR检测结果与分析 | 第28-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 dsRNA表达载体构建及表达 | 第31-53页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·主要材料 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器与耗材 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-40页 |
| ·特异性引物的设计和筛选 | 第31-32页 |
| ·RNA的提取 | 第32-33页 |
| ·cDNA的合成 | 第33页 |
| ·PCR反应 | 第33-34页 |
| ·PCR产物凝胶电泳检测 | 第34页 |
| ·割胶回收目的片段 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·目的DNA片段与T载体的克隆 | 第35-36页 |
| ·pEAS-T1 Cloning Vector与目的片段的连接转化 | 第35页 |
| ·pBackZero-T Vector与目的片段的连接转化体系 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第36-37页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第37页 |
| ·酶切并回收目的片段与表达载体 | 第37-38页 |
| ·连接目的片段和载体片段 | 第38页 |
| ·重组质粒的构建与筛选 | 第38-39页 |
| ·IPTG诱导表达dsRNA | 第39页 |
| ·菌液浓度的测定 | 第39页 |
| ·dsRNA的提取方法 | 第39-40页 |
| ·烟蚜EF1α基因dsRNA原核表达载体的构建及表达 | 第40-41页 |
| ·获得烟蚜EF1α基因序列 | 第40页 |
| ·克隆烟蚜EF1α基因的不同小片段 | 第40-41页 |
| ·构建dsRNA原核表达载体 | 第41页 |
| ·表达dsRNA | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-47页 |
| ·提取的烟蚜RNA结果 | 第41-42页 |
| ·获得的EF1α基因序列结果 | 第42-43页 |
| ·获得的小片段EF1α基因结果 | 第43-45页 |
| ·EF1α基因片段与表达载体LITMUS-28i连接结果 | 第45-46页 |
| ·dsRNA的诱导表达和提取 | 第46-47页 |
| ·烟蚜EF1α基因植物表达载体的构建 | 第47-50页 |
| ·获得烟蚜EF1α基因序列 | 第47页 |
| ·烟蚜EF1α基因正向片段和反向片段的获得 | 第47-48页 |
| ·EF1α基因片段dsRNA植物表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·EF1α基因片段dsRNA植物表达载体的验证 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 烟草病毒病的田间防效试验 | 第53-57页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·烟草品种 | 第53页 |
| ·试验药剂 | 第53页 |
| ·试验地点 | 第53页 |
| ·试验方法 | 第53-54页 |
| ·材料准备 | 第53页 |
| ·试验设计 | 第53-54页 |
| ·药剂的使用 | 第54页 |
| ·调查方法 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录1 本实验所用重要缩写词及中文对照 | 第65-67页 |
| 附录2 本实验所用溶液及培养基的配方 | 第67-71页 |
| 附录3 本实验所用试剂与仪器 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |
