| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 1 前言 | 第15-33页 |
| ·昆虫主要的表皮蛋白家族 | 第15-24页 |
| ·昆虫表皮蛋白的命名与分类 | 第15-17页 |
| ·CPR 表皮蛋白家族 | 第17-23页 |
| ·CPR 表皮蛋白家族的命名 | 第17页 |
| ·CPR 表皮蛋白家族的序列特征 | 第17-18页 |
| ·CPR 表皮蛋白家族的分类 | 第18-21页 |
| ·CPR 表皮蛋白家族的功能 | 第21-23页 |
| ·CPF 和 CPFL 表皮蛋白家族 | 第23-24页 |
| ·Tweedle (TWDL) 家族 | 第24页 |
| ·表皮蛋白基因的研究现状 | 第24-27页 |
| ·蜕皮激素对表皮蛋白基因表达的时序调节 | 第27-31页 |
| ·蜕皮激素与蜕皮周期 | 第27-28页 |
| ·蜕皮激素脉冲的作用 | 第28-29页 |
| ·少数表皮蛋白基因不受蜕皮激素脉冲调控 | 第29-31页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第31-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-59页 |
| ·实验材料 | 第33-35页 |
| ·动物材料 | 第33页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第33页 |
| ·PCR 引物 | 第33-35页 |
| ·实验方法 | 第35-59页 |
| ·中华蜜蜂的饲养与处理 | 第35-36页 |
| ·中华蜜蜂总 RNA 的提取及检测 | 第36-38页 |
| ·利用 TRIZOL 试剂盒提取中华蜜蜂总 RNA | 第36-37页 |
| ·RNA 中基因组 DNA 的去除 | 第37页 |
| ·琼脂糖甲醛变性凝胶进行 RNA 电泳 | 第37-38页 |
| ·cDNA 的合成与纯化 | 第38页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第38页 |
| ·cDNA 回收纯化 | 第38页 |
| ·cDNA 的末端加尾反应（用于 5' RACE） | 第38-39页 |
| ·目的片段的回收、连接及转化 | 第39-40页 |
| ·目的片段的回收 | 第39页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第40页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取及酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·试剂盒质粒提取方案 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第41页 |
| ·DNA 序列测定 | 第41-42页 |
| ·中华蜜蜂目的基因 cDNA 全长序列的获得 | 第42-45页 |
| ·中华蜜蜂目的基因中间片段的获得 | 第42页 |
| ·RACE 法获得 5'端序列 | 第42-43页 |
| ·RACE 法获得 3'端序列 | 第43-44页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第44-45页 |
| ·中华蜜蜂基因组目的基因组全长序列的获得 | 第45-46页 |
| ·EasyPureTMGenomic DNA 试剂盒法提取中华蜜蜂基因组总 DNA | 第45-46页 |
| ·中华蜜蜂目的基因基因组全长序列的获得 | 第46页 |
| ·中华蜜蜂目的基因启动子序列的克隆 | 第46-48页 |
| ·AccCPR1 基因全长 cDNA 的克隆 | 第48-49页 |
| ·总 RNA 提取及反转录 | 第48页 |
| ·AccCPR1 基因全长 cDNA 序列的获得 | 第48-49页 |
| ·AccCPR2 基因全长 cDNA 的克隆 | 第49-50页 |
| ·总 RNA 提取及反转录 | 第49页 |
| ·AccCPR2 基因全长 cDNA 序列的获得 | 第49-50页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测基因的表达 | 第50-51页 |
| ·中华蜜蜂总 RNA 的提取 | 第50页 |
| ·反转录 cDNA 第一条链的合成 | 第50页 |
| ·荧光定量 PCR 检测的反应体系和反应条件 | 第50-51页 |
| ·数据处理 | 第51页 |
| ·半定量 RT-PCR 分析 | 第51页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第51页 |
| ·反转录 cDNA 第一条链的合成 | 第51页 |
| ·半定量 RT-PCR 检测 | 第51页 |
| ·原核表达及抗体制备 | 第51-55页 |
| ·实验试剂配制 | 第51-52页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第52页 |
| ·大肠杆菌 BL21 原核表达蛋白的诱导 | 第52-53页 |
| ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第53-54页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第54页 |
| ·抗体的制备 | 第54页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第54-55页 |
| ·免疫酶联吸附测定检测 | 第55页 |
| ·Western blotting 分析 | 第55-56页 |
| ·免疫组织化学技术 | 第56-57页 |
| ·组织的分离处理 | 第56页 |
| ·组织石蜡切片的制作 | 第56页 |
| ·免疫组织酶化学分析 | 第56-57页 |
| ·数据库及网络资源 | 第57页 |
| ·生物学软件 | 第57-59页 |
| 3. 结果与分析 | 第59-81页 |
| ·AccCPR1 基因的特性分析 | 第59-69页 |
| ·AccCPR1 cDNA 序列分析 | 第59-61页 |
| ·AccCPR1 基因组的克隆与序列分析 | 第61-62页 |
| ·AccCPR1 基因 5'空白区域的克隆与转录因子结合位点的预测 | 第62-63页 |
| ·AccCPR1 基因的发育表达模式和组织特异性表达模式 | 第63-65页 |
| ·20E 对 AccCPR1 基因表达量的影响 | 第65-67页 |
| ·AccCPR1 的免疫定位分析 | 第67-69页 |
| ·AccCPR2 基因的特性分析 | 第69-81页 |
| ·AccCPR2 cDNA 序列分析 | 第69-71页 |
| ·AccCPR2 基因组的克隆与序列分析 | 第71-72页 |
| ·AccCPR2 基因 5'空白区域的克隆与转录因子结合位点的预测 | 第72-73页 |
| ·AccCPR2 基因的发育表达模式 | 第73-75页 |
| ·20E 对 AccCPR2 基因表达量的影响 | 第75-76页 |
| ·AccCPR2 在各种环境应激下的表达 | 第76-78页 |
| ·不同环境刺激处理后的菌落扩散情况分析 | 第78-81页 |
| ·重组蛋白 AccCPR2 的表达 | 第78-79页 |
| ·不同环境刺激处理后的菌落扩散情况分析 | 第79-81页 |
| 4 讨论 | 第81-87页 |
| ·AccCPR1 基因的分离与表达特性分析 | 第81-84页 |
| ·AccCPR1 基因的序列分析 | 第81-82页 |
| ·AccCPR1 基因的表达特征与角质层的发育 | 第82-83页 |
| ·蜕皮激素对 AccCPR1 基因表达的调控作用 | 第83-84页 |
| ·AccCPR2 基因的分离与表达特性分析 | 第84-87页 |
| ·AccCPR2 基因的序列分析 | 第84页 |
| ·AccCPR2 基因的表达特征 | 第84-85页 |
| ·蜕皮激素对 AccCPR2 基因表达的调控作用 | 第85页 |
| ·AccCPR2 的抗逆性表达特性分析 | 第85-87页 |
| 5 结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-99页 |
| 基金项目 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第101页 |
