| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-18页 |
| 第一部分 重组质粒 pVAX1 wapA 的构建与提取 | 第18-30页 |
| 一、 材料与仪器 | 第18-20页 |
| （一） 菌株和质粒 | 第18页 |
| （二） 限制性内切酶和 DNA 分子量标准 | 第18-19页 |
| （三） 其他试药 | 第19页 |
| （四） 仪器 | 第19-20页 |
| 二、 实验方法 | 第20-27页 |
| （一） 细菌的培养 | 第20页 |
| （二） 变形链球菌 UA159 菌株基因组的提取 | 第20-21页 |
| （三） wapA 蛋白全长基因的克隆及载体构建 | 第21-24页 |
| （四） 重组质粒 pVAX1 wapA 的构建 | 第24-25页 |
| （五） pVAX1 的构建 | 第25-26页 |
| （六） 质粒的大量提取 | 第26-27页 |
| 三、 实验结果和讨论 | 第27-29页 |
| （一） PCR 扩增结果 | 第27页 |
| （二） pVAX1 wapA 双酶切鉴定和 pVAX1 单酶切鉴定结果 | 第27-28页 |
| （三） 测序结果 | 第28-29页 |
| 四、 讨论与小结 | 第29-30页 |
| 第二部分 WAPA 蛋白的制备与纯化 | 第30-41页 |
| 一、 材料与仪器 | 第30-31页 |
| （一） 菌株和质粒 | 第30-31页 |
| （二） 其他试药 | 第31页 |
| （三） 仪器 | 第31页 |
| 二、 实验方法 | 第31-36页 |
| （一） pGEX 4T 1 wapA 的构建 | 第31-35页 |
| （二） 蛋白表达体系的建立 | 第35-36页 |
| （三） 目标蛋白表达及纯化 | 第36页 |
| 三、 实验结果 | 第36-39页 |
| （一） pGEX 4T 1 wapA 的鉴定结果. | 第36-37页 |
| （二） 蛋白表达条件的优化结果 | 第37-38页 |
| （三） 蛋白的纯化条件结果 | 第38页 |
| （四） 纯化蛋白的收集结果 | 第38-39页 |
| 四、 讨论与小结 | 第39-41页 |
| 第三部分 载基因纳米粒的制备与优化 | 第41-62页 |
| 一、 材料与仪器 | 第42-43页 |
| （一） 材料和试剂 | 第42页 |
| （二） 仪器 | 第42-43页 |
| 二、 实验方法 | 第43-48页 |
| （一） 材料的合成和鉴定 | 第43-44页 |
| （二） 空白纳米粒的制备和影响因素研究 | 第44-45页 |
| （三） 质粒基因测定的方法学研究 | 第45-47页 |
| （四） 载基因纳米粒的制备 | 第47-48页 |
| 三、 结果与讨论 | 第48-60页 |
| （一） 材料的合成和鉴定结果 | 第48-50页 |
| （二） 空白纳米粒的制备和影响因素研究结果 | 第50-54页 |
| （三） 质粒基因测定的方法学研究 | 第54-57页 |
| （四） 载基因纳米粒的制备结果 | 第57-60页 |
| 四、 小结 | 第60-62页 |
| 第四部分 体外细胞实验 | 第62-68页 |
| 一、 材料与仪器 | 第62-63页 |
| （一） 材料和试剂 | 第62页 |
| （二） 仪器 | 第62-63页 |
| （三） 细胞株 | 第63页 |
| 二、 实验方法和结果 | 第63-67页 |
| （一） 293A 细胞培养 | 第63页 |
| （二） 细胞转染 | 第63页 |
| （三） TRIzol 法提取细胞总 RNA | 第63-64页 |
| （四） 反转录 | 第64页 |
| （五） 定量 PCR | 第64-65页 |
| （六） 结果 | 第65-67页 |
| 三、 讨论与小结 | 第67-68页 |
| 第五部分 抗龋齿疫苗的免疫效应和药效试验 | 第68-88页 |
| 一、 材料与仪器 | 第68-71页 |
| （一） 试剂与材料 | 第68-69页 |
| （二） 抗原和抗体 | 第69页 |
| （三） 仪器 | 第69-70页 |
| （四） 菌种和培养基 | 第70页 |
| （五） 实验动物及饲养 | 第70-71页 |
| 二、 实验方法 | 第71-76页 |
| （一） 防龋基因疫苗肌注免疫 BALB/c 小鼠的实验 | 第71-72页 |
| （二） 定菌鼠龋模型实验 | 第72-76页 |
| 三、 实验结果和讨论 | 第76-85页 |
| （一） 小鼠血清 IgG 抗体水平的结果 | 第76-77页 |
| （二） 小鼠唾液 IgA 抗体水平的结果 | 第77-78页 |
| （三） 致龋菌感染的结果 | 第78-79页 |
| （四） 血清 IgG 及唾液 IgA 特异性抗体检测(间接 ELISA 法) | 第79-81页 |
| （五） 定菌鼠血清 anti wapAIgG 抗体水平的结果 | 第81-82页 |
| （六） 定菌鼠唾液 anti wapAIgA 抗体水平的结果 | 第82-83页 |
| （七） 定菌鼠龋模型龋齿记分 | 第83-85页 |
| 四、 讨论和小结 | 第85-88页 |
| 全文总结 | 第88-90页 |
| 主要创新点 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-95页 |
| 综述 | 第95-105页 |
| 参考文献 | 第99-105页 |
| 攻读学位期间发表论文和参加科研工作情况 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
