| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 目录 | 第11-17页 |
| 符号说明 | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-30页 |
| 1 真核生物DNA聚合酶 | 第18-21页 |
| ·DNA聚合酶d结构及功能 | 第18-19页 |
| ·DNA聚合酶d与疾病 | 第19页 |
| ·POLD1基因结构及功能 | 第19-20页 |
| ·POLD1基因异常表达与癌症的发生 | 第20页 |
| ·POLD1基因与细胞迁移 | 第20-21页 |
| 2 微管 | 第21-23页 |
| ·微管简介 | 第21-22页 |
| ·a-Tubulin结构和功能 | 第22页 |
| ·γ-Tubulin结构和功能 | 第22-23页 |
| 3 微丝 | 第23-25页 |
| ·微丝简介 | 第23页 |
| ·F-actin结构与功能 | 第23页 |
| ·Cortactin结构与功能 | 第23-24页 |
| ·FilaminA结构与功能 | 第24-25页 |
| 4 中间丝 | 第25-26页 |
| ·中间丝简介 | 第25页 |
| ·Vimentin结构与功能 | 第25-26页 |
| ·LaminB结构与功能 | 第26页 |
| 5 细胞骨架相关信号蛋白 | 第26-28页 |
| ·Rho和Cdc42结构与功能 | 第26-27页 |
| ·Paxillin结构与功能 | 第27页 |
| ·FAK结构与功能 | 第27-28页 |
| ·Src结构与功能 | 第28页 |
| 6 本课题研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 第二章 POLD1-siRNA对细胞形态、增殖及迁移的影响 | 第30-46页 |
| 1 引言 | 第30页 |
| 2 实验材料、试剂与仪器 | 第30-31页 |
| ·材料与试剂 | 第30-31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| 3 实验方法 | 第31-34页 |
| ·主要溶液配制 | 第31页 |
| ·细胞复苏、传代及冻存 | 第31-32页 |
| ·细胞培养 | 第32-33页 |
| ·siRNA转染细胞 | 第33页 |
| ·MTT法检测细胞活力 | 第33-34页 |
| ·倒置显微镜观察活细胞形态 | 第34页 |
| ·划痕实验 | 第34页 |
| ·统计学方法 | 第34页 |
| 4 实验结果 | 第34-44页 |
| ·POLD1-siRNA转染细胞时间条件的优化 | 第34-35页 |
| ·POLD1-siRNA对细胞活力的影响 | 第35-36页 |
| ·POLD1-siRNA对HeLa细胞形态的影响 | 第36-37页 |
| ·POLD1-siRNA对HUVEC细胞形态的影响 | 第37-39页 |
| ·POLD1-siRNA对Chang Liver细胞形态的影响 | 第39-40页 |
| ·POLD1-siRNA促进HeLa细胞迁移 | 第40-41页 |
| ·POLD1-siRNA促进HUVEC细胞迁移 | 第41-43页 |
| ·POLD1-siRNA抑制Chang Liver细胞迁移 | 第43-44页 |
| 5 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 POLD1-siRNA对微管在细胞中分布及表达量的影响 | 第46-64页 |
| 1 引言 | 第46-47页 |
| 2 实验材料、试剂与仪器 | 第47页 |
| ·材料与试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| 3 实验方法 | 第47-48页 |
| ·细胞培养 | 第47页 |
| ·siRNA转染细胞 | 第47-48页 |
| ·免疫荧光染色观察a-Tubulin在细胞中分布及表达量变化 | 第48页 |
| ·免疫荧光染色观察γ-Tubulin在细胞中分布及表达量变化 | 第48页 |
| ·统计学方法 | 第48页 |
| 4 实验结果 | 第48-62页 |
| ·POLD1-siRNA对a-Tubulin在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第48-51页 |
| ·POLD1-siRNA对a-Tubulin在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第51-53页 |
| ·POLD1-siRNA对a-Tubulin在Chang Liver细胞中分布及表达量的影响 | 第53-55页 |
| ·POLD1-siRNA对γ-Tubulin在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第55-58页 |
| ·POLDl-siRNA对γ-Tubulin在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第58-60页 |
| ·POLDl-siRNA对γ-Tubulin在Chang Liver细胞中分布及表达量的影响 | 第60-62页 |
| 5 讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 POLD1-siRNA对微丝在细胞中分布及表达量的影响 | 第64-92页 |
| 1 引言 | 第64页 |
| 2 实验材料、试剂与仪器 | 第64-65页 |
| ·材料与试剂 | 第64-65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| 3 实验方法 | 第65-67页 |
| ·细胞培养 | 第65页 |
| ·siRNA转染细胞 | 第65-66页 |
| ·免疫荧光染色观察F-actin在细胞中分布及表达量变化 | 第66页 |
| ·免疫荧光染色观察Cortactin在细胞中分布及表达量变化 | 第66页 |
| ·免疫荧光染色观察FilaminA在细胞中分布及表达量变化 | 第66页 |
| ·统计学方法 | 第66-67页 |
| 4 实验结果 | 第67-88页 |
| ·POLD1-siRNA对F-actin在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第67-69页 |
| ·POLD1-siRNA对F-actin在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第69-72页 |
| ·POLD1-siRNA对F-actin在Chang Liver细胞中分布及表达量的影响 | 第72-74页 |
| ·POLD1-siRNA对Cortactin在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第74-76页 |
| ·POLD1-siRNA对Cortactin在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第76-79页 |
| ·POLD1-siRNA对Cortactin在Chang Liver细胞中分布及表达量的影响 | 第79-81页 |
| ·POLD1-siRNA对FilaminA在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第81-83页 |
| ·POLD1-siRNA对FilaminA在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第83-85页 |
| ·POLD1-siRNA对FilaminA在Chang Liver细胞中分布及表达量的影响 | 第85-88页 |
| 5 讨论 | 第88-92页 |
| 第五章 POLD1-siRNA对中间丝在细胞中分布及表达量的影响 | 第92-110页 |
| 1 引言 | 第92页 |
| 2 实验材料、试剂与仪器 | 第92-93页 |
| ·材料与试剂 | 第92页 |
| ·主要仪器 | 第92-93页 |
| 3 实验方法 | 第93-94页 |
| ·细胞培养 | 第93页 |
| ·siRNA转染细胞 | 第93页 |
| ·免疫荧光染色观察Vimentin在细胞中分布及表达量变化 | 第93-94页 |
| ·免疫荧光染色观察LaminB在细胞中分布及表达量变化 | 第94页 |
| ·统计学方法 | 第94页 |
| 4 实验结果 | 第94-107页 |
| ·POLD1-siRNA对Vimentin在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第94-96页 |
| ·POLD1-siRNA对Vimentin在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第96-98页 |
| ·POLD1-siRNA对Vimentin在Chang Liver细胞中分布及表达量的影响 | 第98-101页 |
| ·POLD1-siRNA对LaminB在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第101-103页 |
| ·POLD1-siRNA对LaminB在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第103-105页 |
| ·POLD1-siRNA对LaminB在Chang Liver细胞中分布及表达量的影响 | 第105-107页 |
| 5 讨论 | 第107-110页 |
| 第六章 POLD1-siRNA对细胞黏着斑蛋白分布及表达量的影响 | 第110-130页 |
| 1 引言 | 第110页 |
| 2 实验材料、试剂与仪器 | 第110-111页 |
| ·材料与试剂 | 第110-111页 |
| ·主要仪器 | 第111页 |
| 3 实验方法 | 第111-112页 |
| ·细胞培养 | 第111页 |
| ·siRNA转染细胞 | 第111-112页 |
| ·免疫荧光染色观察细胞黏着斑蛋白在细胞中分布及表达量变化 | 第112页 |
| 4 结果 | 第112-127页 |
| ·POLD1-siRNA对Paxillin在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第112-114页 |
| ·POLD1-siRNA对Paxillin在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第114-116页 |
| ·POLD1-siRNA对Paxillin在Chang Liver细胞中分布及表达量的影响 | 第116-119页 |
| ·POLD1-siRNA对FAK在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第119-121页 |
| ·POLD1-siRNA对FAK在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第121-123页 |
| ·POLD1-siRNA对Src在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第123-125页 |
| ·POLD1-siRNA对Src在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第125-127页 |
| 5 讨论 | 第127-130页 |
| 第七章 POLD1-siRNA诱导细胞迁移的分子机制 | 第130-156页 |
| 1 引言 | 第130页 |
| 2 实验材料、试剂与仪器 | 第130-132页 |
| ·材料与试剂 | 第130-131页 |
| ·主要仪器 | 第131-132页 |
| 3 实验方法 | 第132-133页 |
| ·细胞培养 | 第132页 |
| ·siRNA转染细胞 | 第132页 |
| ·蛋白质的提取 | 第132页 |
| ·免疫荧光染色观察调控F-actin相关蛋白在细胞中分布及表达量变化 | 第132页 |
| ·Western Blot检测三株细胞中p125蛋白的表达量 | 第132-133页 |
| ·统计学方法 | 第133页 |
| 4 实验结果 | 第133-152页 |
| ·POLD1-siRNA对p125在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第133-135页 |
| ·POLD1-siRNA对p125在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第135-137页 |
| ·POLD1-siRNA对p125在Chang Liver细胞中分布及表达量的影响 | 第137-139页 |
| ·POLD1-siRNA对Rho在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第139-141页 |
| ·POLD1-siRNA对Rho在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第141-143页 |
| ·POLD1-siRNA对Rho在Chang Liver细胞中分布及表达量的影响 | 第143-145页 |
| ·POLD1-siRNA对p-Rac1/Cdc42在HeLa细胞中分布及表达量的影响 | 第145-147页 |
| ·POLD1-siRNA对p-Rac1/Cdc42在HUVEC细胞中分布及表达量的影响 | 第147-149页 |
| ·POLD1-siRNA对p-Rac1/Cdc42在Chang Liver细胞中分布及表达量的影响 | 第149-151页 |
| ·敲低POLD1基因的表达抑制三株细胞中p125含量 | 第151-152页 |
| 5 讨论 | 第152-156页 |
| 第八章 结论与展望 | 第156-158页 |
| 参考文献 | 第158-170页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第170-172页 |
| 致谢 | 第172-174页 |
