| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| ·研究背景 | 第7页 |
| ·黄酮类化合物 | 第7页 |
| ·黄酮类化合物的生理活性 | 第7页 |
| ·大肠杆菌生产黄酮类物质圣草酚的研究进展 | 第7-9页 |
| ·大肠杆菌以 L-酪氨酸为底物生产圣草酚的机理 | 第7-8页 |
| ·大肠杆菌生产黄酮类化合物圣草酚的国内外研究现状 | 第8-9页 |
| ·代谢工程技术强化大肠杆菌胞内丙二酰辅酶 A 的研究进展 | 第9-11页 |
| ·丙二酰辅酶 A 在圣草酚合成中的重要性 | 第9-10页 |
| ·代谢工程技术强化大肠杆菌胞内丙二酰辅酶 A 的国内外研究现状 | 第10-11页 |
| ·立题依据 | 第11页 |
| ·研究目的和意义 | 第11-12页 |
| ·主要研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-23页 |
| ·材料 | 第13-15页 |
| ·菌株和质粒 | 第13-14页 |
| ·培养基 | 第14页 |
| ·所用酶、试剂、引物以及相关试剂盒 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14-15页 |
| ·培养方法 | 第15-16页 |
| ·代谢工程技术强化丙二酰辅酶 A 合成途径的构建 | 第16-18页 |
| ·DNA 操作方法 | 第16页 |
| ·E. coli BL21 (DE3)的 ackA 基因敲除 | 第16页 |
| ·表达载体的构建 | 第16-18页 |
| ·可溶性表达黄酮 3'羟化酶(F3'H) | 第18-20页 |
| ·基因合成 | 第18页 |
| ·表达载体构建 | 第18-20页 |
| ·重组菌株的构建及验证 | 第20-21页 |
| ·分析检测方法 | 第21-23页 |
| ·蛋白可溶性表达鉴定 | 第21页 |
| ·细胞内辅酶 A 的测定 | 第21-22页 |
| ·圣草酚的测定 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-41页 |
| ·代谢工程技术强化丙二酰辅酶 A 的积累 | 第23-28页 |
| ·敲除 ackA 菌株的构建和验证 | 第23-24页 |
| ·acs 和 ACC 基因的扩增与表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·过量表达 acs 和 ACC 以及敲除 ackA 重组菌的构建和验证 | 第25-26页 |
| ·过量表达 acs 和 ACC 以及敲除 ackA 对胞内丙二酰辅酶 A 浓度的影响.. | 第26-27页 |
| ·本节总结 | 第27-28页 |
| ·可溶性表达黄酮 3'羟化酶(F3'H)融合蛋白及平衡相应基因表达 | 第28-32页 |
| ·构造 tF3'H-tCPR 融合基因表达载体 | 第28页 |
| ·可溶性表达鉴定 | 第28-30页 |
| ·构建平衡基因表达的圣草酚合成途径 | 第30-31页 |
| ·圣草酚的 LC-MS/MS 鉴定 | 第31-32页 |
| ·本节总结 | 第32页 |
| ·重组菌的发酵条件优化与控制 | 第32-35页 |
| ·诱导温度优化与控制 | 第33页 |
| ·IPTG 诱导浓度优化与控制 | 第33-34页 |
| ·IPTG 诱导时机优化与控制 | 第34-35页 |
| ·本节总结 | 第35页 |
| ·优化条件下圣草酚产量与辅酶 A 含量 | 第35-39页 |
| ·条件优化后的生长曲线 | 第35-36页 |
| ·优化条件下重组菌株胞内辅酶 A 含量 | 第36-37页 |
| ·优化条件下的圣草酚产量 | 第37-38页 |
| ·本节总结 | 第38-39页 |
| ·本章总结 | 第39-41页 |
| 主要结论与展望 | 第41-43页 |
| 主要结论 | 第41-42页 |
| 展望 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |
