| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| ·研究背景 | 第9页 |
| ·HepⅠ的性质和结构特征 | 第9-10页 |
| ·HepⅠ的作用机制 | 第10-11页 |
| ·HepⅠ的应用 | 第11-12页 |
| ·生产低分子量肝素和超低分子量肝素 | 第11-12页 |
| ·血液残存肝素的消除 | 第12页 |
| ·肝素及肝素类物质精确结构的解析 | 第12页 |
| ·HepⅠ的原核发酵生产的研究 | 第12-13页 |
| ·组合标签在重组蛋白原核表达中的应用 | 第13页 |
| ·高密度发酵在重组蛋白原核表达中的应用 | 第13-14页 |
| ·立题意义和研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 黄杆菌肝素酶Ⅰ双标签载体的构建 | 第15-25页 |
| ·引言 | 第15页 |
| ·实验材料 | 第15-17页 |
| ·实验试剂 | 第15-16页 |
| ·实验仪器 | 第16页 |
| ·菌种和质粒 | 第16页 |
| ·溶液配制 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-21页 |
| ·His-HepⅠ序列的 PCR 扩增 | 第17-18页 |
| ·重组克隆载体 pMD-19T-His-HepⅠ的构建 | 第18-20页 |
| ·重组表达载体 pGEX-4T-1-His-HepⅠ的构建 | 第20-21页 |
| ·结果与讨论 | 第21-24页 |
| ·扩增模板 pET15b-Hep I 的提取 | 第21页 |
| ·His-HepⅠ序列的 PCR 扩增 | 第21页 |
| ·重组载体 pMD-19T-His-HepⅠ的鉴定结果 | 第21-22页 |
| ·重组载体 pGEX-4T-1-His-HepⅠ的酶切鉴定结果 | 第22-23页 |
| ·目的基因的测序 | 第23-24页 |
| ·本章小结 | 第24-25页 |
| 第三章 双标签重组工程菌的摇瓶优化与高密度发酵 | 第25-39页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·实验试剂 | 第25-26页 |
| ·实验仪器 | 第26页 |
| ·溶液配制 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-28页 |
| ·培养方法 | 第26-27页 |
| ·分析方法 | 第27-28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-36页 |
| ·菌体生长量的测定 | 第28-29页 |
| ·菌体生长曲线的测定 | 第29页 |
| ·培养条件对产酶水平的影响 | 第29-31页 |
| ·诱导条件对产酶水平的影响 | 第31-35页 |
| ·5 L 发酵罐中重组菌株的高密度发酵 | 第35-36页 |
| ·本章小结 | 第36-39页 |
| 第四章 双标签融合蛋白 GST-His-HepⅠ的分离纯化和酶学特性的初步研究 | 第39-49页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·实验试剂 | 第39-40页 |
| ·实验仪器 | 第40页 |
| ·溶液配制 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-43页 |
| ·粗酶液的制备 | 第41页 |
| ·GST-His-HepⅠ双标签融合蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·GST- His-HepⅠ和 His-HepⅠ酶学性质的初步研究 | 第42-43页 |
| ·分析方法 | 第43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-47页 |
| ·GST-His-HepⅠ融合蛋白的纯化结果 | 第43-44页 |
| ·GST-His-HepⅠ和 His-HepⅠ酶学性质的初步研究 | 第44-47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| 第五章 论文总结 | 第49-51页 |
| ·主要结论 | 第49-50页 |
| ·问题与展望 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 附录 1：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第55页 |
| 附录 2：全文缩略词一览表 | 第55-56页 |
| 附录 3：pGEX-4T-1 的质粒图谱和双标签表达载体的构建流程图 | 第56页 |
