| 符号说明 | 第1-8页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| 中文摘要 | 第13-16页 |
| Abstract | 第16-19页 |
| 1 文献综述 | 第19-68页 |
| 引言 | 第19-20页 |
| ·辣椒疫病的发生与防治 | 第20-26页 |
| ·辣椒疫病的危害及主要症状 | 第20-21页 |
| ·辣椒疫病的病原学研究 | 第21-22页 |
| ·辣椒疫霉的生理分化 | 第22-23页 |
| ·辣椒疫病的防治 | 第23-25页 |
| ·田间管理 | 第23页 |
| ·化学防治 | 第23-24页 |
| ·生物防治 | 第24-25页 |
| ·辣椒疫病的防治存在的问题 | 第25-26页 |
| ·植物病原真菌致病基因的研究现状 | 第26-33页 |
| ·与侵染结构产生有关的基因 | 第26-27页 |
| ·与角质层及细胞壁降解有关的基因 | 第27-28页 |
| ·与信号传导有关的基因 | 第28-29页 |
| ·与寄主代谢反应相关的基因 | 第29-31页 |
| ·真菌毒素类 | 第31-32页 |
| ·其它致病基因 | 第32-33页 |
| ·辣椒疫病的抗性遗传与抗病基因研究进展 | 第33-35页 |
| ·辣椒抗疫病的遗传特点 | 第33-34页 |
| ·抗疫病基因的分子标记与QTL定位 | 第34-35页 |
| ·果胶酶的研究进展 | 第35-39页 |
| ·果胶 | 第35-36页 |
| ·果胶酶 | 第36-38页 |
| ·果胶酶的分布 | 第36-37页 |
| ·果胶酶类型上的分化 | 第37-38页 |
| ·果胶酶的分子生物学研究 | 第38页 |
| ·果胶酶在致病过程中的作用 | 第38-39页 |
| ·果胶裂解酶的研究进展 | 第39-47页 |
| ·果胶裂解酶(PEL)的存在与来源 | 第40页 |
| ·果胶裂解酶的分子量及分子组成 | 第40页 |
| ·对果胶裂解酶结构的研究 | 第40-42页 |
| ·果胶裂解酶的性质与作用机理 | 第42-43页 |
| ·果胶裂解酶分子生物学研究 | 第43-47页 |
| ·果胶裂解酶在细菌上的研究进展 | 第43-44页 |
| ·果胶裂解酶在真菌上的研究进展 | 第44-45页 |
| ·果胶裂解酶在植物上的研究进展 | 第45-46页 |
| ·果胶裂解酶在线虫上的研究进展 | 第46页 |
| ·果胶裂解酶在疫霉上的研究进展 | 第46-47页 |
| ·农杆菌介导的基因瞬时表达体系 | 第47-49页 |
| ·瞬时表达的优点 | 第47-48页 |
| ·农杆菌瞬时表达的原理 | 第48页 |
| ·PVX表达载体 | 第48-49页 |
| ·基因沉默技术及其机理 | 第49-55页 |
| ·基因沉默现象的发现 | 第49-50页 |
| ·基因沉默机理 | 第50-55页 |
| ·转录水平的基因沉默 | 第50-53页 |
| ·转录后水平的基因沉默 | 第53-55页 |
| ·基因沉默技术在真菌基因功能研究中的应用 | 第55-59页 |
| ·RNAi在真菌基因功能研究中的策略 | 第56-58页 |
| ·发夹结构RNA介导的RNAi | 第56页 |
| ·利用反向双元启动子载体介导的RNAi | 第56-57页 |
| ·直接转入dsRNA或siRNA介导的RNAi | 第57-58页 |
| ·RNA干扰技术和基因敲除技术的优缺点比较及分析 | 第58-59页 |
| ·卵菌基因沉默研究进展 | 第59-68页 |
| ·卵菌沉默机制 | 第60-61页 |
| ·卵菌稳定沉默 | 第61-62页 |
| ·卵菌瞬时基因沉默 | 第62-63页 |
| ·基因沉默与表型变化的关系 | 第63页 |
| ·卵菌中遗传转化体系的建立 | 第63-66页 |
| ·选择性标记 | 第64页 |
| ·原生质体转化(protoplast transformation) | 第64-65页 |
| ·农杆菌转化(agrobacterium-mediated transformation) | 第65-66页 |
| ·粒子轰击方法转化(transformation by bombardent) | 第66页 |
| ·电转化(electroporation) | 第66页 |
| ·卵菌中基因沉默技术的应用及发展 | 第66-68页 |
| 2. 材料方法 | 第68-91页 |
| ·材料 | 第68-71页 |
| ·辣椒疫霉菌株 | 第68页 |
| ·菌株与质粒 | 第68页 |
| ·酶和生化试剂 | 第68页 |
| ·仪器 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68-69页 |
| ·溶液配制 | 第69-71页 |
| ·实验方法 | 第71-91页 |
| ·辣椒疫霉基因组果胶裂解酶(PEL)基因信息分析 | 第71页 |
| ·辣椒疫霉菌株SD33果胶裂解酶基因家族成员克隆 | 第71-73页 |
| ·基因克隆引物设计 | 第71-72页 |
| ·辣椒疫霉DNA提取 | 第72页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel基因克隆 | 第72-73页 |
| ·辣椒疫霉菌株SD33果胶裂解酶(PcPEL)基因家族系统进化分析 | 第73-74页 |
| ·辣椒疫霉菌株SD33果胶裂解酶基因家族成员在菌丝体内表达 | 第74-76页 |
| ·辣椒疫霉菌株SD33总RNA的提取和cDNA的合成 | 第74-75页 |
| ·紫外检测RNA产率和纯度 | 第75页 |
| ·反转录cDNA第一链的合成 | 第75页 |
| ·RT-PCR | 第75-76页 |
| ·辣椒疫霉菌株SD33果胶裂解酶(Pcpel)基因家族成员在病原寄主互作过程中表达模式分析 | 第76-80页 |
| ·接种辣椒叶片 | 第77页 |
| ·受试辣椒叶片总RNA的捉取(Trizol法) | 第77页 |
| ·RNA紫外检测及反转录 | 第77页 |
| ·荧光定量PCR | 第77-80页 |
| ·辣椒疫霉菌株SD33果胶裂解酶基因在植物体内瞬时表达 | 第80-85页 |
| ·农杆菌瞬时表达载体构建引物设计 | 第80-82页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶瞬时表达载体构建 | 第82-83页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶瞬时表达载体农杆菌转化 | 第83-84页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶农杆菌瞬时表达接种辣椒和烟草 | 第84-85页 |
| ·辣椒疫霉菌株SD33果胶裂解酶(Pcpel)基因稳定沉默和过量表达 | 第85-89页 |
| ·卵菌稳定转化载体构建引物设计 | 第85-86页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶稳定沉默表达和过量表达载体构建 | 第86-87页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶稳定沉默和过量表达重组载体质粒提取 | 第87-88页 |
| ·辣椒疫霉菌转化步骤 | 第88-89页 |
| ·辣椒疫霉基因沉默和过量表达转化子的筛选和分子验证 | 第89页 |
| ·辣椒疫霉Pcpel基因沉默和过量表达转化子筛选及其生物学性状分析 | 第89-91页 |
| ·游动孢子诱导 | 第89页 |
| ·转化子表型分析 | 第89-90页 |
| ·致病性测定 | 第90-91页 |
| 3 结果与分析 | 第91-119页 |
| ·辣椒疫霉Pcpel基因克隆 | 第91-102页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel14基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第91-92页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel15基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第92-93页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel16基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第93-95页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel17基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第95页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel18基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第95-96页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel19基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第96-97页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel20基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第97-98页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel21基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第98-99页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel22基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第99-102页 |
| ·辣椒疫霉Pcpel基因系统进化分析 | 第102-105页 |
| ·22个Pcpel基因序列比对 | 第102-104页 |
| ·22个Pcpel基因系统进化分析 | 第104-105页 |
| ·Pcpel基因在辣椒疫霉菌体内表达分析 | 第105-106页 |
| ·Pcpel基因在辣椒疫霉与寄主互作中表达模式分析 | 第106-108页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶基因农杆菌瞬时表达 | 第108-111页 |
| ·Pcpel基因PVX载体构建及农杆菌转化 | 第108-109页 |
| ·Pcpel基因农杆菌转化子在辣椒体内瞬时表达 | 第109-110页 |
| ·Pcpel基因农杆菌转化子在烟草体内瞬时表达 | 第110-111页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel基因稳定沉默和过量表达突变体的获得 | 第111-114页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel沉默和过量表达转化子表型分析 | 第114-116页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶Pcpel沉默及过量表达转化子致病性测定 | 第116-119页 |
| ·Pcpel沉默转化子致病性测定 | 第116-118页 |
| ·Pcpel过量表达转化子致病性测定 | 第118-119页 |
| 4. 结论与讨论 | 第119-128页 |
| ·辣椒疫霉基因组信息分析 | 第119页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶基因确定 | 第119-121页 |
| ·辣椒疫霉12个果胶裂解酶基因在病原与寄主互作过程中表达模式异同 | 第121-122页 |
| ·辣椒疫霉12个果胶裂解酶基因PVX表达后农杆菌接种症状差异 | 第122-123页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶基因沉默和过表达 | 第123-124页 |
| ·辣椒疫霉果胶裂解酶基因沉默和过量表达突变体致病力变化 | 第124-126页 |
| ·结论 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-148页 |
| 附录 | 第148-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 攻读博士学位期间发表文章 | 第150页 |
